Konfokālās fluorescences mikroskopijas pamatstruktūra
(1) Skenēšanas modulis
Skenēšanas modulis galvenokārt sastāv no adatas cauruma gaismas joslas (kontrolē optisko slāņu biezumu), spektroskopa (maina gaismas izplatīšanās virzienu atkarībā no viļņa garuma), emisijas fluorescences kolorimetra (izvēlas gaismu noteiktā viļņa garuma diapazonā noteikšanai) un detektors (fotopavairotāja caurule). Jauktā fluorescence fluorescējošā paraugā nonāk skenerī, un pēc tam, kad tā ir atlasīta ar noteikšanas cauruma gaismas joslu, spektrometru un kolorimetru, tā tiek sadalīta dažādās monohromatiskajās fluorescencēs, kuras tiek noteiktas dažādos fluorescences kanālos un veido atbilstošus konfokālos attēlus. Tajā pašā laikā datora ekrānā var parādīt vairākus paralēlus monohromatiskus fluorescences attēlus un to saliktos attēlus.
(2) Fluorescences mikroskopijas sistēma
Mikroskops ir galvenā LSCM sastāvdaļa, kas ir saistīta ar sistēmas attēlveidošanas kvalitāti. Mikroskopa optisko ceļu var viegli ievietot bezgalīgi attālā optiskajā sistēmā ar optiskām opcijām, neietekmējot attēlveidošanas kvalitāti un mērījumu precizitāti. Objektīvam jābūt lielas skaitliskās apertūras plakana lauka apohromatiskajam objektīvam, kas ir labvēlīgs fluorescences iegūšanai un skaidrai attēlveidošanai. Objektīva lēcu grupas pārveidošana, krāsu filtru grupas izvēle, skatuves kustības regulēšana un fokusa plaknes atmiņas bloķēšana ir automātiski jāvada datoram.
Fluorescences mikroskops, ko izmanto lāzera skenēšanas konfokālajā mikroskopijā, parasti ir tāds pats kā parastajam fluorescences mikroskopam, taču tam ir savas īpašības: tam ir jābūt savienotam ar skeneri, lai lāzers varētu iekļūt mikroskopa objektīvā, lai apstarotu paraugu un padarītu to parauga izstarotā fluorescence sasniedz detektoru; Nepieciešama gaismas ceļa pārveidošanas iekārta, kas dzīvsudraba lampas pārvērš lāzeros, un dzīvsudraba lampas gaismas intensitāti var regulēt.
(3) Parastie lāzeri
Lāzera skenēšanas konfokālajā mikroskopijā izmantotie lāzera avoti ietver viena lāzera un vairāku lāzeru sistēmas, un parasti izmantotie lāzeri ietver šādus trīs veidus:
Pusvadītāju lāzers: 405 nm (tuvu ultravioleto spektra līnijai)
Argona jonu lāzers: 457 nm, 477 nm, 488 nm, 514 nm (zili zaļa gaisma)
He-Ne lāzers: 543nm (zaļās gaismas He-Ne zaļais lāzers) 633nm (sarkanās gaismas He-Ne sarkanais lāzers)
UV lāzers (UV lāzers): 351 nm, 364 nm (UV gaisma)
(4) Palīgaprīkojums
Gaisa dzesēšanas, ūdens dzesēšanas sistēmas un regulējami barošanas avoti.
Lāzerskenējošā konfokālā mikroskopa darbības pamatprincips ir vispirms no lāzera izstarot noteikta viļņa garuma ierosmes gaismu. Pēc pastiprināšanas gaisma iziet cauri skenera apgaismotajai cauruma gaismas joslai, veidojot punktveida gaismas avotu. Objektīva lēca fokusējas uz parauga fokusa plakni, un attiecīgie apgaismotie punkti uz parauga tiek ierosināti un izstaro fluorescenci. Pēc tam, kad tas iziet cauri noteikšanas cauruma gaismas joslai, tas sasniedz detektoru un tiek attēlots datora uzraudzības ekrānā. Tādā veidā pilnīgu konfokālo attēlu veido katra parauga punkta fluorescences attēli fokusa plaknē, ko sauc par gaismas šķēli.
