Detalizēti aprakstiet konfokālās mikroskopijas fluorescējošu zondu atlases posmus un metodes
Eksperimentos ar konfokālajiem mikroskopiem dažus eksperimentālos indikatorus var noteikt, izmantojot paša parauga vai eksogēno vielu autofluorescenci, taču lielākajai daļai pārbaudāmo vielu nav izmērāmas fluorescences un tās ir jāmarķē ar fluorescējošām zondēm. Tam ir izmērāms dienasgaismas signāls. Tātad, kā izvēlēties fluorescējošās zondes konfokālajai mikroskopijai?
1. Nosakiet pārbaudāmos rādītājus atbilstoši eksperimenta mērķim
Kad noteikšanas indekss ir noteikts, tiek noteikts arī fluorescējošo zondu atlases diapazons. Redzams, ka izvēli, kuru fluorescējošu zondi izmantot eksperimentā, nosaka eksperimenta mērķis. Piemēram, ja eksperimenta mērķis ir izpētīt kalcija jonu izmaiņas kardiomiocītos, kad notiek priekškambaru mirdzēšana, var noteikt, ka pārbaudāmā viela ir kalcija joni kardiomiocītos, un fluorescējošo zondu atlases diapazons ir ierobežots līdz. kalcija jonu zondes, kas var iezīmēt dzīvās šūnas. Adata.
2. Nosakiet pieejamo fluorescējošo zondu diapazonu
Jaunām eksperimentālām vielām vai indikatoriem, ja eksperimenta mērķis nav izpētīt jaunas fluorescējošas zondes, varat izvēlēties piemērot nobriedušas zondes un marķēšanas metodes. Fluorescējošo zondu veidu vai diapazonu, kas var marķēt pārbaudāmo vielu, var noteikt, meklējot autoritatīvu literatūru vai labi zināmu reaģentu uzņēmumu produktu katalogus gan mājās, gan ārvalstīs.
3. Izpētīt, vai fluorescējošās zondes raksturlielumi atbilst fluorescējošo paraugu sagatavošanas prasībām.
Fluorescējošo zondu īpašības tieši ietekmē paraugu marķēšanu un eksperimentālos rezultātus. Tāpēc pirms fluorescējošu zondu atlases un paraugu marķēšanas eksperimentā ir pilnībā jāizprot to fluorescences raksturlielumi. Izpētāmās fluorescējošo zondu īpašības ir šādas:
1. Gaismas zondu un paraugu reakcijas raksturlielumi
2. Fluorescējošo zondu jutība un fluorescences intensitāte
3. Ar fluorescējošām zondēm iezīmētu paraugu spektrālās īpašības
4. Fluorescences stabilitāte
5. Mijiedarbība starp vairāku fluorescenci paraugā
