Atšķirība starp fluorescences mikroskopu un parasto optisko mikroskopu
Fluorescences mikroskopa un parastā optiskā mikroskopa atšķirība, fluorescences mikroskops un parastais optiskais mikroskops atšķiras, parauga novērošanai nav nepieciešams parasta gaismas avota apgaismojums, bet gan noteikta gaismas viļņa garuma (parasti ultravioletā, zili violetā) izmantošana. parauga ierosināšana zem mikroskopa fluorescējošā materiāla ietvaros, lai tas izstaro fluorescējošu gaismu, tāpēc fluorescences mikroskopa loma gaismas avotā nav tiešs apgaismojums, bet gan kā sava veida paraugu stimulācija iekšējās gaismas fluorescencei. Fluorescences mikroskopa avots nav tiešs apgaismojums, bet gan kā enerģijas avots, lai stimulētu fluorescējošu vielu paraugā. Iemesls, kāpēc mēs varam novērot paraugu, nav saistīts ar gaismas avota apgaismojumu, bet gan fluorescences fenomenu, ko rada fluorescējošā viela paraugā pēc ierosinātās gaismas enerģijas absorbēšanas. Var redzēt, ka fluorescences mikroskopa īpašības galvenokārt ir tādas, ka tā gaismas avots var nodrošināt lielu skaitu specifiska ierosmes gaismas viļņa garuma diapazona, lai fluorescējošās vielas pārbaudītajā paraugā varētu iegūt nepieciešamo ierosmes gaismas intensitāti. Tajā pašā laikā fluorescences mikroskopam jābūt atbilstošai filtru sistēmai. Fluorescences mikroskops ir **fluorescences histoķīmijas pamatrīks. Tas sastāv no īpaši augsta spiediena gaismas avota, filtru sistēmas (tostarp ierosmes un slāpēšanas filtra plāksnes), optiskās sistēmas un fotografēšanas sistēmas un citiem galvenajiem komponentiem, ir noteikta gaismas viļņa garuma izmantošana, lai stimulētu paraugu izstarot fluorescenci.
1. Fluorescences ierosmes veids: atkarībā no viļņa garuma diapazona gaisma ir sadalīta UV ierosināšanas metodē (izmantojot ultravioleto apgaismojumu) un BV ierosmes metodē (izmantojot zilo violeto gaismu) divu veidu UV ierosmes metode ir īsāka par 400 nm ultravioletās gaismas tuvumā. uzbudinājums. Šajā metodē nav redzamas ierosmes gaismas, tāpēc novērotā fluorescence parāda krāsvielai raksturīgo fluorescenci, un ir viegli atšķirt specifisko fluorescenci paraugā no fona audu pašfluorescences.
2. BV ierosmes metode: Metode ir centrēta uz 404 nm, 434 nm no ultravioletās uz zilo gaismu ierosināšanai. Šī metode izmanto zilo gaismu, lai apstarotu paraugu, tāpēc fluorescences novērošanas sistēmas nogriešanas filtram ir jāizmanto filtrs, kas var pilnībā bloķēt zilo gaismu un pilnībā izlaist vēlamo zaļo un dzelteno fluorescenci. Fluorescējošie pigmenti fluorescējošu antivielu metodei. Tā kā ierosmes gaismas maksimālās absorbcijas viļņa garums un fluorescences maksimālās emisijas viļņa garums ir tuvu viens otram, BV ierosmes metodē izmantotajiem filtriem jābūt asiem nogriešanas filtriem. Šī metode izmanto zilo gaismu kā ierosmes gaismu, tāpēc fluorohroma absorbcijas efektivitāte ir augstāka un var iegūt gaišāku attēlu. Trūkums ir tāds, ka fluorescenci zem 500 nm nevar redzēt, un virs 500 nm viss attēls izskatās dzeltens. Fluorescējošo antivielu metodē lielākā daļa specifiskuma tiek vērtēta pēc fluorohromam raksturīgās krāsas, tāpēc iepriekš aprakstītās BV ierosmes metodes trūkumi mēdz būt ārkārtīgi ietekmīgi, apspriežot smalko specifiku.
