Transmisijas fluorescences mikroskopijas un atstarošanas fluorescences mikroskopijas atšķirības un priekšrocības un trūkumi
1. Transmisijas fluorescences mikroskops: ierosmes gaismas avots tiek pārraidīts caur parauga materiālu caur kondensatoru, lai ierosinātu fluorescenci. Parasti izmantotos tumšā lauka koncentratorus vai parastos koncentratorus var izmantot, lai pielāgotu reflektoru, lai paraugā pārveidotu ierosmes gaismu un sānu gaismu. Šis ir salīdzinoši vecmodīgs fluorescences mikroskops. Tā priekšrocība ir spēcīga fluorescence zemā palielinājumā, savukārt trūkums ir tas, ka tā fluorescence vājinās, palielinoties palielinājumam. Tāpēc tas ir labāks lielāku paraugu materiālu novērošanai.
2. Krītošā stara fluorescences mikroskops: tas ir jauna veida fluorescences mikroskops, kas ir izstrādāts mūsdienās. Atšķirībā no iepriekšējās, ierosmes gaisma nokrīt no objektīva uz parauga virsmu, izmantojot to pašu objektīvu kā apgaismojuma kondensatoru un objektīva lēcu fluorescences savākšanai. Optiskajam ceļam ir jāpievieno divu krāsu staru atdalītājs, kas veido 45 grādu leņķi ar fotourānu. Uzbudinājuma gaisma tiek atspoguļota objektīva lēcā un sakrājas uz parauga. Parauga radītā fluorescence un ierosmes gaisma, kas atstarota no objektīva lēcas un vāka stikla virsmas, vienlaikus nonāk objektīva lēcā un atgriežas divkrāsu staru atdalītājā, atdalot ierosmes gaismu un fluorescenci. Pēc tam atlikušo ierosmes gaismu absorbē bloķējošais filtrs. Ja tiek izmantotas dažādas ierosmes filtru, divu krāsu staru atdalītāju un bloķējošo filtru kombinācijas, tie var apmierināt dažādu fluorescējošu reakciju produktu vajadzības. Šī fluorescējošā mikroskopa priekšrocības ir vienmērīgs redzes lauka apgaismojums, skaidra attēlveidošana un spēcīgāka fluorescence ar lielāku palielinājumu.
Transmisijas fluorescences mikroskopijas priekšrocības un trūkumi
Gaismas avots: augstspiediena dzīvsudraba lampa vai halogēna lampa.
Prožektora spogulis: izmantojiet tumša lauka prožektoru, lai atdalītu ierosmi un fluorescenci.
Objektīva lēca: var izmantot jebkura veida objektīvu.
Paraugs: plāni paraugi ir piemērotāki pārraides novērošanai.
Priekšrocības: ① Tumšā lauka kondensatora izmantošanas dēļ ierosmes gaisma nevar iekļūt objektīva objektīvā, tādējādi ir viegli izveidot tumšu fonu un panākt labu kontrastu, un novērošanai var izmantot jebkuru objektīvu. ② Izmantojot zema palielinājuma objektīvu, tas ir gaišāks nekā atstarojošais fluorescences mikroskops.
Trūkums: pareizi jānoregulē prožektora centrs un augstums, pretējā gadījumā nevar iegūt spilgtu fluorescējošu attēlu. Tumšā lauka prožektora fokusa attāluma ierobežojuma dēļ nevar izmantot bieza stikla priekšmetstikliņus. Redzes lauka apgaismojuma laukums nedrīkst būt pārāk liels, pretējā gadījumā fluorescējošā parauga fluorescences krāsa var izbalināt. Biezi vai necaurspīdīgi paraugi nav piemēroti.
Atstarojošās fluorescences mikroskopijas priekšrocības un trūkumi
Gaismas avots: augstspiediena dzīvsudraba lampa vai halogēna lampa.
Fokusēšanas objektīvs: tā kā objektīvs kalpo kā fokusēšanas objektīvs, nav nepieciešams fokusēšanas objektīvs.
Objektīva lēca: izmantotajam objektīvam jāspēj pārraidīt pietiekami daudz ultravioleto gaismu un pašam neradīt fluorescenci, neierobežojot skaitlisko apertūru.
Paraugs: var novērot gan biezus, gan necaurspīdīgus paraugus.
Priekšrocības: ① Tā kā objektīvs kalpo arī kā prožektors, tas neprasa daudz regulēšanu. ② Izmantojot Kolar apgaismojuma metodi, var izmantot apertūras un redzes lauka atvērumu efektus. Objektīva objektīva skaitliskā apertūra nav ierobežota, un augstas izšķirtspējas attēlus var iegūt arī ar lielu palielinājumu. Var tikt izmantoti arī biezi vai necaurspīdīgi paraugi. var izmantot arī citas novērošanas metodes ar atstaroto fluorescenci, īpaši ar fāzu starpības metodi un pārraides diferenciālo traucējumu metodi. Tā var izvairīties no nevajadzīgas fluorescences krāsas izbalēšanas.
Trūkums: izmantojot zemes palielinājuma objektīvu, attēls ir salīdzinoši tumšs, tāpēc ir jāizmanto augstas skaitliskās apertūras objektīvs. Filtru sistēmai ir efektīvi jānodala ierosmes luminiscence un fluorescence.
