Atšķirības starp fluorescences mikroskopiju un konfokālo mikroskopiju
fluorescences mikroskops
1. Fluorescences mikroskops izmanto ultravioleto gaismu kā gaismas avotu, lai apstarotu pārbaudīto objektu, izraisot tā izdalīšanos fluorescencē, un pēc tam novērojiet objekta formu un stāvokli zem mikroskopa. Fluorescences mikroskopiju izmanto, lai izpētītu vielu absorbciju, transportēšanu, izplatīšanu un lokalizāciju šūnās. Dažas vielas šūnās, piemēram, hlorofils, var fluoresce, ja tās ir pakļautas ultravioletā starojumam; Ir arī dažas vielas, kas pašas nevar izstarot fluorescenci, bet var arī izstarot fluorescenci, ja tās iekrāso ar fluorescējošām krāsvielām vai fluorescējošām antivielām un apstaro ar ultravioleto gaismu. Fluorescences mikroskopija ir viens no kvalitatīvo un kvantitatīvo pētījumu instrumentiem šādām vielām.
2. Fluorescences mikroskopa princips:
(A) Gaismas avots: gaismas avots izstaro dažādu viļņu garumu gaismu (no ultravioletā līdz infrasarkanajam).
B) ierosmes filtra gaismas avots: specifiska viļņa garuma gaismas pārraide, kas paraugā var izraisīt fluorescenci, vienlaikus bloķējot gaismu, kas ir bezjēdzīga aizraujošai fluorescencei.
C) Fluorescējošie paraugi: parasti iekrāsoti ar fluorescējošiem pigmentiem.
(D) Filtra bloķēšana: tas selektīvi pārraida fluorescenci, bloķējot ierosmes gaismu, kuru paraugs neuzsūc, un arī daži viļņu garumi fluorescencē tiek selektīvi pārraidīti. Mikroskops, kas izmanto ultravioleto gaismu kā gaismas avotu, lai apgaismotais objekts izstarotu fluorescenci. Elektronu mikroskopu vispirms salika Knorr un Haruska Berlīnē, Vācijā 1931. gadā. Šajā mikroskopā gaismas staru kūļu vietā tiek izmantoti ātrgaitas elektronu stari. Sakarā ar daudz īsāku elektronu plūsmas viļņa garumu, salīdzinot ar gaismas viļņiem, elektronu mikroskopa palielinājums var sasniegt 8 0 0000 reizes ar minimālo izšķirtspējas robežu 0,2 nanometrus. Skenējošais elektronu mikroskops, kas pirmo reizi tika izmantots 1963. gadā, ļauj cilvēkiem redzēt sīkās struktūras uz objektu virsmas.
3. Lietojumprogrammas joma: izmanto mazu objektu attēlu palielināšanai. Parasti izmanto bioloģijas, medicīnas, mikroskopisko daļiņu utt. Novērošanai
konfokālais mikroskops
1. Konfokālais mikroskops atstarotajam gaismas ceļam pievieno daļēji atstarojošu pusi objektīvu, kas novirza atstaroto gaismu, kas caur objektīvu ir gājusi citos virzienos. Tās fokusa punktā ir deflektors ar caurumu, kas atrodas fokusa punktā, un aiz deflektiem ir fotokomultiplier caurule. Var iedomāties, ka atstaroto gaismu pirms un pēc noteikšanas gaismas fokusa nevar koncentrēties uz mazo caurumu caur šo konfokālo sistēmu, un to bloķē defleks. Tātad fotometrs mēra atstaroto gaismas intensitāti fokusa punktā.
2. Princips: tradicionālie optiskie mikroskopi izmanto lauka gaismas avotus, un katra parauga punkta attēlu ietekmē difrakcija vai izkliedēta gaisma no blakus esošajiem punktiem; Lāzera skenēšanas konfokālā mikroskops izmanto lāzera staru, lai apgaismotu caurumu un veidotu punktu gaismas avotu, lai skenētu katru punktu parauga fokusa plaknē. Parauga apgaismotais punkts tiek attēlots noteikšanas caurumā, un to saņem pa punktu vai līniju ar fotopultipliera cauruli (PMT) vai aukstas savienošanas ierīci (CCCD) pēc tam, kad datora monitora ekrānā ātri izveidojot fluorescences attēlu. Apgaismojuma caurums un noteikšanas caurums ir konjugēti attiecībā pret objektīva fokusa plakni. Fokālās plaknes punkti vienlaikus ir vērsti uz apgaismojuma caurumu un emisijas caurumu, un punkti ārpus fokusa plaknes netiks attēloti noteikšanas caurumā. Iegūtais konfokālais attēls ir parauga optiskais šķērsgriezums, pārvarot izplūdušo attēlu trūkumus vispārīgi mikroskopos.
