Fluorescences mikroskopa pamatdarbība
a. Izslēdziet telpā gaismu un ieslēdziet mikroskopa dzīvsudraba lampu;
b. Atlasiet atbilstošo filtru atbilstoši paraugā iezīmētajam fluoresceīnam;
c. Novietojiet paraugu un atrodiet piemērotu redzes lauku;
d. Ja nepieciešams uzņemt attēlus, lūdzu, apstipriniet, ka krāsainā filma ir ievietota kamerā;
e. Ieslēdziet Selfie ierīci, izvēlieties manuālo pārnesumu, parasti uzņemšanas ātrums ir 0.5-10 sekunžu robežās;
f. Pēc lietošanas izslēdziet visu strāvu un pierakstiet lietošanu. uz
uz
3. Fluorescences attēla ierakstīšanas metode
Fluorescences mikroskopā redzamajam fluorescences attēlam ir gan morfoloģiskās īpašības, gan fluorescences krāsa un spilgtums. Vērtējot rezultātus, tie abi ir jāapvieno visaptverošam spriedumam. Rezultāti tiek reģistrēti, pamatojoties uz subjektīviem rādītājiem, tas ir, darbinieku vizuālo novērojumu. Kā vispārējs kvalitatīvs novērojums, pamatā uzticams. Attīstoties tehnoloģijām un zinātnei, tiek izmantoti objektīvi rādītāji, lai reģistrētu sprieduma rezultātus dažādās pakāpēs, piemēram, šūnu spektrofotometrus, attēlu analizatorus un citus instrumentus. Tomēr ar šiem instrumentiem reģistrētie rezultāti ir jāapvieno arī ar subjektīviem spriedumiem. uz
Fluorescences mikroskopa fotografēšana ir ļoti nepieciešama fluorescences attēlu ierakstīšanai. Tā kā fluorescence ir viegli izbalināta un vājināta, rezultāti ir jāreģistrē reāllaikā. Metode būtībā ir tāda pati kā parastajā mikrofotogrāfijā. Vienkārši jāizmanto ātrgaitas gaismjutīga plēve. Tā kā ultravioletajai gaismai ir spēcīga ietekme uz fluorescences slāpēšanu, piemēram, FITC marķieriem, fluorescences spilgtums samazināsies par 50 procentiem, ja to apstaro ar ultravioleto gaismu 30 s. Tāpēc, ja ekspozīcijas ātrums ir pārāk zems, fluorescējošu attēlu nevar uzņemt. Vispārējās pētniecības fluorescences mikroskopiem ir pusautomātiskas vai pilnībā automātiskas fotomikrogrāfijas sistēmas ierīces. uz
uz
4. Piesardzības pasākumi, izmantojot fluorescences mikroskopiju
a. Strādājiet stingri saskaņā ar fluorescences mikroskopa rūpnīcas instrukciju prasībām un nemainiet programmu pēc vēlēšanās. uz
b. Pārbaude jāveic tumšā telpā. Pēc ieiešanas tumšajā telpā pievienojiet strāvas padevi un iededziet īpaši augsta spiediena dzīvsudraba lampu 5-15 minūtes. Kad gaismas avota spēcīgā gaisma ir stabila, acis pilnībā pielāgojas tumšajai telpai un pēc tam sāk novērot paraugu. uz
c. Lai novērstu ultravioleto staru bojājumus acīm, regulējot gaismas avotu, valkājiet aizsargbrilles. uz
d. Pārbaudes laiks ir vēlams 1-2 stundas katru reizi. Ja tas pārsniedz 90 minūtes, ultraaugstspiediena dzīvsudraba spuldzes gaismas intensitāte pakāpeniski samazināsies un fluorescence vājinās; pēc tam, kad paraugs ir apstarots ar ultravioleto gaismu 3-5 minūtes, arī fluorescence tiks ievērojami vājināta; tāpēc tas nedrīkst pārsniegt 2-3 stundas. . uz
e. Fluorescējošā mikroskopa gaismas avota kalpošanas laiks ir ierobežots, un paraugi ir jāpārbauda centralizēti, lai ietaupītu laiku un aizsargātu gaismas avotu. Kad laiks ir karsts, jāpievieno ventilatori, lai izkliedētu siltumu, un jaunās spuldzes jāreģistrē no to lietošanas laika sākuma. Ja vēlaties to izmantot vēlreiz pēc tam, kad spuldze ir nodzisusi, pirms spuldzes iedegšanas uzgaidiet, līdz spuldze ir pietiekami atdzisusi. Izvairieties no gaismas avota iedegšanas vairākas reizes dienā. uz
f. Novērojiet paraugu tūlīt pēc krāsošanas, jo fluorescence laika gaitā pakāpeniski vājinās. Ja paraugs tiek glabāts polietilēna plastmasas maisiņā 4 grādu temperatūrā, fluorescences pavājināšanās laiks var tikt aizkavēts un montāžas līdzekļa iztvaikošana var tikt novērsta. uz
g. Fluorescences spilgtuma sprieduma standarts: tas parasti ir sadalīts četros līmeņos, tas ir, "-" nozīmē, ka fluorescence nav redzama vai ir vāja. "pluss" nozīmē, ka bija redzama tikai skaidri redzama fluorescence. "Plus plus" nozīmē, ka ir redzama spilgta fluorescence. "plus plus plus" nozīmē redzamu spilgtu fluorescenci.
