Fluorescences mikroskopijas noteikšanas metode
fluorescences mikroskops
Fluorescences mikroskopija ir būtisks imūnfluorescences citoķīmijas instruments. Tas sastāv no galvenajām sastāvdaļām, piemēram, gaismas avota, filtru plākšņu sistēmas un optiskās sistēmas. Tas izmanto noteiktu gaismas viļņa garumu, lai ierosinātu paraugu un izstaro fluorescenci, kas tiek palielināta caur objektīvu un okulāru sistēmu, lai novērotu parauga fluorescences attēlu (1. attēls).
(1) Gaismas avots
Mūsdienās par gaismas avotu parasti izmanto 200 W īpaši augsta spiediena dzīvsudraba lampu. Tas ir izgatavots no kvarca stikla, ar sfērisku formu vidū un ar noteiktu daudzumu dzīvsudraba piepildīta iekšpusē. Darbības laikā izlāde starp diviem elektrodiem izraisa dzīvsudraba iztvaikošanu, un spiediens sfēras iekšpusē strauji palielinās. Kad dzīvsudrabs pilnībā iztvaiko, tas var sasniegt 50-70 standarta atmosfēras spiedienu, kas parasti aizņem apmēram 5-15 minūtes. Īpaši augsta spiediena dzīvsudraba spuldžu luminiscence ir rezultāts izlādei starp elektrodiem, kas nepārtraukti disociē un samazina dzīvsudraba molekulas un izstaro fotonus. Tas izstaro spēcīgu ultravioleto un zili violeto gaismu, kas ir pietiekams dažādu fluorescējošu vielu ierosināšanai, tāpēc to plaši izmanto fluorescences mikroskopos.
Piesardzības pasākumi fluorescences mikroskopa lietošanai
(1) Stingri ievērojiet fluorescences mikroskopa rūpnīcas norādījumus un nemainiet programmu patvaļīgi.
(2) Pārbaude jāveic tumšā telpā. Pēc ieiešanas tumšajā telpā pievienojiet strāvu un iededziet īpaši augsta spiediena dzīvsudraba lampu 5-15 minūtes. Pēc tam, kad gaismas avots izstaro spēcīgu gaismu un stabilizējas, acīm pirms parauga novērošanas pilnībā jāpielāgojas tumšajai telpai.
(3) Lai novērstu UV bojājumus acīm, regulējot gaismas avotu, jāvalkā aizsargbrilles.
(4) Pārbaudes laikam katru reizi ir jābūt 1-2 stundām. Ja tas pārsniedz 90 minūtes, ultraaugstspiediena dzīvsudraba spuldzes gaismas intensitāte pakāpeniski samazinās un fluorescence vājinās; Paraugi, kas pakļauti ultravioletajam starojumam 3-5 dienas
Pēc min ievērojami samazinājās arī fluorescence; Tātad maksimālais ilgums nedrīkst pārsniegt 2-3 stundas.
(5) Fluorescējošā mikroskopa gaismas avota kalpošanas laiks ir ierobežots, un, lai ietaupītu laiku, paraugs jāpārbauda centralizēti.
Ietaupiet laiku un aizsargājiet gaismas avotu. Kad laiks ir karsts, jāpievieno elektriskais ventilators, lai izkliedētu siltumu un atdzesētu. Nomainot jaunu spuldzi, lietošanas laiks jāreģistrē no sākuma. Kad gaisma ir izslēgta un vēlaties to izmantot vēlreiz, pirms spuldzes aizdedzināšanas ir jāpagaida, līdz spuldze pietiekami atdziest. Izvairieties no gaismas avota iedegšanas vairākas reizes dienā.
(6) Novērojiet paraugu tūlīt pēc krāsošanas, jo fluorescence laika gaitā pakāpeniski vājinās. Ja paraugs tiek uzglabāts polietilēna plastmasas maisiņā 4 grādu temperatūrā, tas var aizkavēt fluorescences vājināšanās laiku un novērst montāžas līdzekļa iztvaikošanu.
(7) Fluorescences spilgtuma vērtējuma kritēriji parasti ir sadalīti četros līmeņos, proti, "viens" — nav vai ir redzama vāja fluorescence. "+" — ir redzama tikai redzama fluorescence. ++- Redzams ar spilgtu fluorescenci. "+++" — redzama un žilbinoša fluorescence.
