Kā izvēlēties starp apgriezto mikroskopu un fluorescences mikroskopu?
Mikroskops ir svarīgs instruments šūnu kultūrā un ar to saistītos atvasinājumu eksperimentos. Šobrīd tirgū ir pieejami dažāda veida mikroskopi, un izvēlēties vajadzībām atbilstošu un piemērotu mikroskopu ir izaicinājums. Zemāk mēs iepazīstināsim ar apgriezto mikroskopu un fluorescences mikroskopu principiem, lai ikviens varētu izvēlēties.
Apgrieztais mikroskops, tāpat kā parastais mikroskops, galvenokārt sastāv no trim daļām: mehāniskās daļas, apgaismojuma daļas un optiskās daļas. Apgrieztā mikroskopa sastāvs ir tāds pats kā parastam vertikālam mikroskopam, izņemot to, ka objektīva lēca un apgaismojuma sistēma ir apgriezti, pirmais atrodas zem skatuves, bet otrais virs skatuves. Šī struktūra ievērojami paplašina efektīvo attālumu starp apgaismojuma prožektoru sistēmu un skatuvi, atvieglojot biezāku novērošanas instrumentu, piemēram, kultivēšanas trauku un šūnu kultūras pudeles novietošanu (protams, var izmantot arī stikla priekšmetstikliņus), savukārt darba attālums starp objektīvs un materiālam nav jābūt ļoti lielam. Apgriezto mikroskopu izmanto medicīnas un veselības iestādes, universitātes un pētniecības institūti mikroorganismu, šūnu, baktēriju, audu kultūru, suspensiju, nogulumu uc novērošanai. Ar to var nepārtraukti novērot šūnu un baktēriju proliferācijas un dalīšanās procesus barotnē un var uztvert jebkuru šī procesa formu. Plaši izmanto tādās jomās kā citoloģija, parazitoloģija, onkoloģija, imunoloģija, gēnu inženierija, rūpnieciskā mikrobioloģija un botānika.
Fluorescences mikroskopiju izmanto, lai pētītu vielu absorbciju, transportēšanu, izplatību un lokalizāciju šūnās. Pārbaudītajam objektam ir divi fluorescences ģenerēšanas veidi: spontāna fluorescence, ko tieši izstaro ultravioletais starojums; Sekundārā fluorescence rodas, ja novēroto objektu apstrādā ar fluorescējošām krāsvielām un pakļauj ultravioletajai gaismai pirms fluorescences izstarošanas. Dažas vielas šūnās, piemēram, hlorofils, pēc ultravioletā starojuma iedarbības rada spontānu fluorescenci; Dažas vielas pašas par sevi var neizstarot fluorescenci, bet, ja tās ir iekrāsotas ar fluorescējošām krāsvielām vai fluorescējošām antivielām, tās var izstarot arī sekundāru fluorescenci ultravioletā starojuma ietekmē. Fluorescences mikroskops izmanto augstas gaismas efektivitātes punktveida gaismas avotu, lai izstarotu noteiktu gaismas viļņa garumu (UV 365 nm vai UV zils 420 nm) caur krāsu filtrēšanas sistēmu kā ierosmes gaismu, kas ierosina paraugā esošās fluorescējošās vielas, lai izstarotu dažādas fluorescences krāsas. Pēc tam to novēro, palielinot objektīvu un okulāru. Tādā veidā, pat ar vāju fluorescenci, tas ir viegli atpazīstams un ļoti jutīgs spēcīga kontrastējoša fona apstākļos. To galvenokārt izmanto šūnu struktūras, funkciju un ķīmiskā sastāva pētīšanai.
Fluorescences mikroskopiju var iedalīt divos veidos: pārraides veids un krītošais tips. Pirmais ir primitīvāks, bet otrais ir progresīvāks. Abu veidu fluorescences mikroskopu pamatkonstrukcija ir līdzīga, un galvenā atšķirība ir tāda, ka pārraidītā ierosmes gaisma iziet cauri paraugam, radot fluorescenci kopumā. Pēc tam fluorescence nonāk objektīva lēcā, un jo lielāks palielinājums, jo vājāka ir fluorescence; Krītošā ierosmes gaisma projicējas uz parauga virsmas, radot fluorescenci, kas nonāk objektīva lēcā. Jo lielāks palielinājums, jo spēcīgāka ir fluorescence, padarot to piemērotu lielas jaudas novērošanai. Fluorescences mikroskopa galvenās sastāvdaļas ir dzīvsudraba lampas gaismas avots, ierosmes filtra plāksne, spektrofotometrs (piliena tipa), slāpēšanas filtra plāksne un tumšā lauka kondensators (transmisijas tips). Turklāt dzīvsudraba spuldžu stiprās sildīšanas dēļ lielākā daļa no tām ir aprīkotas arī ar siltumu absorbējošiem filtriem. Dažiem fluorescences mikroskopiem ir arī fāzes kontrasta objektīvs un apļveida apertūra, kas ļauj novērot fāzes kontrastu. Dažiem fluorescences mikroskopiem ir apgriezta struktūra, kas ir arī apgriezts mikroskops utt.
Turklāt iepriekš minētos mikroskopus var salikt digitālos mikroskopos, uzstādot CCD, kas pārvērš mikroskopā redzamos fiziskos attēlus digitālos analogajos attēlos un attēlo tos datorā. Rezultātā mēs varam novirzīt mūsu pētījumus mikro jomā no tradicionālās binokulārās novērošanas uz reproducēšanu, izmantojot displejus, tādējādi uzlabojot darba efektivitāti.
