Uzlabotas lāzerskenēšanas daudzfotonu mikroskopu priekšrocības
Lāzerskenējošs daudzfotonu mikroskops ir būtisks optiskās mikroskopijas uzlabojums, kas galvenokārt izpaužas spējā novērot dzīvu šūnu, fiksēto šūnu un audu dziļās struktūras un iegūt skaidras un asas daudzslāņu Z-plaknes struktūras, proti, optiskās šķēles, ko var izmantot, lai izveidotu trīs{2}dimensiju paraugus. Konfokālais mikroskops izmanto lāzera gaismas avotu, kas tiek paplašināts, lai aizpildītu visu objektīva fokusa plakni, un pēc tam caur objektīva lēcu sistēmu saplūst ļoti mazos punktos parauga fokusa plaknē. Saskaņā ar objektīva skaitlisko apertūru spilgtākā apgaismojuma punkta diametrs ir aptuveni 0,25-0,8 μm un dziļums ir aptuveni 0,5-1,5 μm. Konfokālā punkta lielumu nosaka mikroskopa konstrukcija, lāzera viļņa garums, objektīva raksturlielumi, skenēšanas vienības stāvokļa iestatījumi un parauga īpašības. Lauka mikroskopa apgaismojuma diapazons un dziļums ir liels, savukārt konfokālā mikroskopa apgaismojums ir fokusēts uz fokusa punktu fokusa plaknē. Konfokālās mikroskopijas galvenā priekšrocība ir tā, ka tā var veikt smalku optisku griezumu bieziem fluorescējošiem paraugiem (līdz 50 μm vai vairāk), kuru biezums ir aptuveni no 0,5 līdz 1,5 μm. Optisko slāņu attēlu sēriju var iegūt, pārvietojot paraugu uz augšu un uz leju, izmantojot mikroskopa Z-ass pakāpju motoru. Attēla informācijas vākšana tiek kontrolēta * * plaknē, netraucējot signālus, kas izstaro no citām parauga pozīcijām. Pēc fona fluorescences ietekmes noņemšanas un signāla un trokšņa attiecības palielināšanas konfokālo attēlu kontrasts un izšķirtspēja ir ievērojami uzlaboti salīdzinājumā ar tradicionālajiem lauka apgaismojuma fluorescences attēliem. Daudzos paraugos sarežģīti strukturālie komponenti savijas, veidojot sarežģītas sistēmas, taču, tiklīdz var savākt pietiekami daudz optisko sekciju, mēs varam izmantot programmatūru, lai tās rekonstruētu trīs dimensijās. Šī eksperimentālā metode ir plaši izmantota bioloģiskajos pētījumos, lai noskaidrotu sarežģītās strukturālās un funkcionālās attiecības starp šūnām vai audiem.
