Uzlabotas lāzerskenēšanas daudzfotonu mikroskopijas priekšrocības
Lāzerskenējošais daudzfotonu mikroskops ir būtisks uzlabojums optiskajā mikroskopijā, galvenokārt spējā novērot dzīvo un fiksēto šūnu un audu dziļo struktūru un iegūt skaidras un asas daudzslāņu Z plaknes struktūras, ti, optiskās šķēles, no kurām var izveidot parauga trīsdimensiju cieto struktūru. Konfokālā mikroskopija izmanto lāzera gaismas avotu, kas tiek paplašināts, lai aizpildītu visu objektīva objektīva aizmugurējo fokusa plakni, un pēc tam iziet cauri objektīva lēcu sistēmai, lai parauga fokusa plaknē saplūstu ļoti mazos plankumos. Atkarībā no objektīva skaitliskās apertūras spilgtā apgaismojuma punkta diametrs ir aptuveni 0,25 ~ 0,8 μm un dziļums ir aptuveni 0,5 ~ 1,5 μm. Konfokālā punkta izmēru nosaka mikroskopa konstrukcija, lāzera viļņa garums, objektīva lēcas īpašības, skenēšanas vienības stāvokļa iestatījums un parauga raksturs. Lauka mikroskopiem ir liels apgaismojuma diapazons un apgaismojuma dziļums, savukārt konfokālie mikroskopi koncentrē apgaismojumu vienā fokusa punktā fokusa plaknē. Konfokālā mikroskopa galvenā priekšrocība ir spēja veidot smalkas optiskās sekcijas no bieziem fluorescējošiem paraugiem (līdz 50 μm vai vairāk), ar sekciju biezumu aptuveni 0,5–1,5 μm. Optisko griezumu attēlu sēriju var iegūt, pārvietojot paraugu uz augšu un uz leju ar mikroskopa Z-ass pakāpju motoru. Attēla informācijas iegūšana tiek kontrolēta pirmajā plaknē, un to netraucē signāli, kas izstaro no citām parauga vietām. Pēc fona fluorescences efektu noņemšanas un signāla-trokšņa attiecības palielināšanas konfokālā attēla kontrasts un izšķirtspēja ir ievērojami uzlaboti salīdzinājumā ar parastajiem lauka apgaismojuma fluorescences attēliem. Daudzos paraugos daudzi sarežģīti strukturālie komponenti savijas, veidojot sarežģītas sistēmas, taču, tiklīdz var iegūt pietiekami daudz optisko sekciju, mēs varam tās rekonstruēt trīs dimensijās, izmantojot programmatūru. Šī eksperimentālā metode ir plaši izmantota bioloģiskajos pētījumos, lai noskaidrotu sarežģītās strukturālās un funkcionālās attiecības starp šūnām vai audiem.
