Mikroskopiskās attēlveidošanas klase 丨 Plaša lauka fluorescences mikroskops
Dzīvu šūnu attēlveidošanas lietojumos plaša lauka fluorescences mikroskopija atvieglo pielipušo šūnu dinamikas novērošanu, kas audzētas īpašās vides kamerās, kas novietotas uz mikroskopa skatuves. Visvienkāršākajā konfigurācijā standarta apgriezts audu kultūras mikroskops, kas aprīkots ar EPI fluorescences apgaismojumu, ir savienots ar laukuma masīva detektoru sistēmu (parasti CCD kameru), piemērotiem fluorescences filtriem un aizvaru sistēmu, lai ierobežotu pārmērīgu šūnu pakļaušanu kaitīgai ierosmes gaismai. . Pamata fluorescences mikroskopija balstās uz rūpīgi saskaņotiem traucējumu filtriem, lai izvēlētos konkrētus joslas platumus apgaismošanai un izstarotās gaismas noteikšanai. Gaismas avoti ietver dzīvsudraba, ksenona un metālu halogenīdu loka spuldzes, staru izplešanās lāzeru sistēmas un gaismas diodes (LED), kurām visām nepieciešamas atšķirīgas filtru specifikācijas. Sintētiskajiem fluoroforiem, ko izmanto fluorescences mikroskopijā, ir emisijas spektri, kas aptver gandrīz ultravioleto, redzamo un tuvu infrasarkano staru apgabalu. Ģenētiski kodētu fluorescējošu proteīnu izmantošana ir ievērojami paplašinājusi fluorescences mikroskopijas iespējas dzīvu šūnu attēlveidošanā, ļaujot pētniekiem precīzi mērķēt uz interesējošiem subcelulāriem reģioniem.
Nuohai LS 18, jauna veida gaismas loksnes apgaismojuma mikroskops, ko neatkarīgi izstrādājis Nuohai, ir īpaši izstrādāts caurspīdīgu lielu audu paraugu augstas izšķirtspējas 3D attēlveidošanai un ir paredzēts dažādu neskartu audu, piemēram, smadzeņu, liesas, tievās zarnas, izpētei. , nierēm, plaušām, sirdij un audzējiem. 3D precīza orgānu struktūra.
Platlauka fluorescences gadījumā pilnas apertūras emisija, ko savāc mikroskopa objektīvs, maksimāli palielina ierakstīto signālu, vienlaikus samazinot nepieciešamo ekspozīcijas laiku. Tādējādi paraugus var attēlot ar ļoti īsiem gaismas periodiem. Galvenais platlauka attēlveidošanas trūkums ir tāds, ka fluorescence no reģioniem, kas atrodas tālu no fokusa plaknes, kā arī fona signāls ir nevēlama gaisma, kas bieži aizsedz interesējošās iezīmes. Tāpēc plaša lauka attēlveidošana dod vislabākos rezultātus, ja interesējošās pazīmes ir lielas (piemēram, organellas) vai ļoti punktētas pēc būtības. Plašs dzīvu šūnu paraugu klāsts, tostarp pielipušās šūnas, baktērijas, raugs un ļoti plānas audu sekcijas, ir ideāli piemēroti plaša lauka fluorescences attēlveidošanai, tomēr biezākus audus (vairāk nekā 5 mikronus) vislabāk var izmantot ar progresīvāku attēlveidošanas metodi.
Lai gan ir bijuši daudzi sasniegumi fluorescējošā attēlveidošanā ar sintētiskām fluorescējošām krāsvielām, kvantu punktiem un fluorescējošiem proteīniem, dažos gadījumos ir lietderīgi apvienot fluorescenci ar citām attēlveidošanas metodēm. Piemēram, DIC var izmantot kopā ar plaša lauka fluorescenci, lai uzraudzītu šūnu dzīvotspēju un vispārējo morfoloģiju, pētot interesējošās parādības konkrētiem marķētiem mērķiem. DIC un fluorescences iegūšana vienā attēlā parasti ir nepraktiska, taču pareizi konfigurētā mikroskopā abas metodes var izmantot secīgi. Tādējādi pēc attēlveidošanas epifluorescences režīmā DIC attēlus var iegūt no fluorescējoši marķētiem paraugiem, izmantojot caurlaidīgo gaismu. Pēcanalīzes laikā abus attēlus var apvienot. Vienlaicīga DIC un fluorescences attēlu iegūšana ir iespējama progresīvās platlauka mikroskopa konfigurācijās, izmantojot spektrāli atdalītu apgaismojumu (piemēram, redzamo un gandrīz infrasarkano) un divu kameru vai dalīta skata kameru adapterus. Lielākajā daļā lāzera skenēšanas konfokālo mikroskopu attēlus var iegūt gan fluorescences, gan DIC režīmos vienlaikus, tādējādi novēršot vajadzību pēc iegūšanas. Fāzes kontrastu un Hofmana modulācijas kontrastu var izmantot arī kopā ar plata lauka fluorescences mikroskopiju. Tomēr šajās tehnikās objektīva lēca ir īpaša, neatkarīgi no tā, vai tas ir fāzes gredzens vai Hofmana modulācijas plāksne, tas izraisīs emisijas intensitātes zudumu par 5-15 procentiem.
Raksta saite: Instrumentu aprīkojuma tīkls https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
