Bioloģisko paraugu sagatavošana un novērošana elektronu mikroskopijai
Mikroskopa izšķirtspēja ir atkarīga no izmantotās gaismas viļņa garuma, elektronu mikroskops sāka parādīties 1933. gadā ir saistīts ar daudz īsāka viļņa garuma izmantošanu nekā elektronu stara redzamā gaisma kā gaismas avots, lai izšķirtspēja tā var sasniegt, nekā optiskais mikroskops ir ievērojami uzlabojies. Atšķirīgais gaismas avots nosaka arī virkni atšķirību starp elektronu mikroskopu un optisko mikroskopu.
Atbilstoši atšķirībām elektronu stara attēlveidošanas principā un parauga lomai dažādos veidos, mūsdienu elektronu mikroskops ir izstrādāts, lai veidotu vairākus veidus, pašlaik * parasti tiek izmantots transmisijas elektronu mikroskops un skenējošais elektrons. mikroskopu, pirmais var būt diapazonā no 1,000-1,000,000 reizes no izmaiņu diapazona kopējā palielinājuma, otrais var būt { kopējā palielinājumā {4}}, 000 reizes lielāks par kopējo palielinājumu izmaiņām starp. Šis eksperiments koncentrējas uz paraugu sagatavošanu divu veidu mikroskopiem, transmisijas elektronu mikroskopam un skenējošajam elektronu mikroskopam.
Materiāli
1. Celms Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) slīpi.
2. Šķīdumi vai reaģenti Amilacetāts, koncentrēta sērskābe, bezūdens etanols, sterils ūdens, 2% nātrija fosfovolframskābe (pH 6.5-8.0) ūdens šķīdums, 0,3% polivinilformaldehīda (izšķīdināts trihlormetānā) šķīdums, citohroms c, amonija acetāts, plazmīda pBR322.
3. Instrumenti vai citi piederumi Parasts optiskais mikroskops, vara siets, porcelāna piltuve, vārglāze, plakana trauks, sterila birete, sterilas pincetes, lancete, priekšmetstikliņi, ** skaitīšanas plāksne, vakuuma pārklājējs, kritisko punktu žāvētājs un tā tālāk.
Darbības soļi
(I) Paraugu sagatavošana un transmisijas elektronu mikroskopijas novērošana
1. Metāla sieta apstrāde
Paraugus optiskajai mikroskopijai novieto uz priekšmetstikliņiem novērošanai. Tomēr transmisijas elektronu mikroskopijā, tā kā elektroni nevar iekļūt stikla loksnē, kā nesēju var izmantot tikai sieta materiālu, ko parasti sauc par nesējsietu. Nesējsietu var iedalīt daudzās dažādās specifikācijās dažādu materiālu un formu dēļ, no kuriem * parasti tiek izmantots 200-400 sieta (caurumu skaits) vara sieta. Vara siets pirms lietošanas jāapstrādā, lai noņemtu uz tā esošos netīrumus un saglabātu to tīru, pretējā gadījumā tas ietekmēs atbalsta plēves kvalitāti un paraugu fotoattēlu skaidrību. Šajā eksperimentā izmantotais vara siets ir 400 siets, ko var apstrādāt šādi: vispirms dažas stundas balināt ar amilacetātu, pēc tam vairākas reizes skalot ar destilētu ūdeni un pēc tam balināt bezūdens etanolā. dehidratācija. Ja vara siets ar iepriekš minēto metodi joprojām nav tīrs, var izmantot koncentrētas sērskābes atšķaidīšanai (1:1), iegremdējot 1 ~ 2 minūtēs, vai 1% NaOH šķīdumā, kas vārīts vairākas minūtes, vairākas reizes noskalojot ar destilētu ūdeni. , ievieto bezūdens etanola dehidratācijā, kas jāizmanto.
2. Atbalsta plēves sagatavošana
Parauga novērošanā nesējtīklā jābūt arī pārklātam ar nestrukturētas, viendabīgas plēves slāni, pretējā gadījumā no nesēja tīkla caurumiem iztecēs nelieli paraugi, šo plēves slāni parasti sauc par atbalsta plēvi vai nesējplēvi. Atbalsta plēvei jābūt caurspīdīgai elektroniem, un tās biezumam parasti jābūt mazākam par 20 nm; elektronu stara ietekmē plēvei jābūt arī noteiktai mehāniskās izturības pakāpei, tā var saglabāt struktūras stabilitāti un tai ir laba siltumvadītspēja; turklāt atbalsta tīklam nevajadzētu būt redzamai struktūrai zem elektronu mikroskopa, un tam nav ķīmiskas reakcijas ar pārvadāto paraugu, un tas netraucē parauga novērošanu, un tā biezums parasti ir aptuveni 15 nm. Atbalsta plēvi var izgatavot no plastmasas plēves (piemēram, uguns kokvilnas plēves, polietilēna formaldehīda plēves u.c.), oglekļa plēves vai metāla plēves (piemēram, berilija plēves u.c.). Ikdienas darba apstākļos prasības var izpildīt ar plastmasas plēvi, savukārt plastmasas plēves sagatavošana ugunsdzēsības kokvilnas līmplēvē ir salīdzinoši vienkārša, taču izturība nav tik spēcīga kā polietilēna formaldehīda plēvei.
