Prasības fluorescējošo mikroskopa paraugu izgatavošanai
(1) Stikla slidkalniņš
Slaida biezumam jābūt no 0,8 līdz 1,2 mm. Ja priekšmetstiklis ir pārāk biezs, tas, no vienas puses, absorbē vairāk gaismas, un, no otras puses, tas nevar izraisīt ierosmes gaismas uzkrāšanos uz parauga. Priekšmetstikliņam jābūt gludam, vienāda biezuma un bez acīmredzamas spontānas fluorescences. Dažreiz ir nepieciešami kvarca stikla priekšmetstikliņi.
(2) Nosedz stikla priekšmetstikliņu
Pārsega stikla biezums ir aptuveni 0,17 mm, kas ir gluds un tīrs. Lai pastiprinātu ierosmi, var izmantot arī traucējumu pārklājuma stiklu. Šis ir īpaši izstrādāts pārklājošais stikls ar vairākiem vielu slāņiem (piemēram, magnija fluorīdu), kam ir dažādi traucējumu efekti uz dažādiem gaismas viļņa garumiem. Tas var ļaut fluorescencei iziet vienmērīgi, savukārt atstarošanas ierosme var ierosināt paraugu.
(3) Paraugs
Audu šķēles vai citi paraugi nedrīkst būt pārāk biezi, jo ierosmes gaisma pārsvarā tiek patērēta parauga apakšējā daļā, savukārt augšējā daļa, ko tieši novēro objektīva lēca, nav pilnībā ierosināta. Turklāt šūnu pārklāšanās vai piemaisījumu maskēšana var ietekmēt spriedumu.
(4) Blīvēšanas līdzeklis
Glicerīnu parasti izmanto kā stiprinājuma līdzekli, un tam nedrīkst būt spontānas fluorescences, bezkrāsains un caurspīdīgs. Fluorescences spilgtums ir spilgtāks pie pH 8,5–9,5, un to nav viegli ātri izbalināt. Tāpēc par blīvēšanas līdzekli parasti izmanto vienādu glicerīna un 0,5 mol/l karbonāta buferšķīduma maisījumu ar pH 9.0-9.5.
(5) Spoguļu eļļa
Vērojot paraugus, izmantojot tumšā lauka fluorescences mikroskopu un eļļas mikroskopu, ir nepieciešams izmantot lēcu eļļu. Vislabāk ir izmantot speciāli izgatavotu nefluorescējošu lēcu eļļu, kuru var arī aizstāt ar glicerīnu, kā minēts iepriekš. Var izmantot arī šķidro parafīnu, taču laušanas koeficients ir zems un nedaudz ietekmē attēla kvalitāti.
Piesardzības pasākumi fluorescences mikroskopa lietošanai
(1) Stingri ievērojiet fluorescences mikroskopa rūpnīcas rokasgrāmatas prasības un nemainiet programmu patvaļīgi.
(2) Pārbaude jāveic tumšā telpā. Pēc ieiešanas tumšajā telpā pievienojiet strāvas padevi un iededziet īpaši augsta spiediena dzīvsudraba lampu 5 līdz 15 minūtes. Pēc tam, kad gaismas avots izstaro spēcīgu gaismu un stabilizējas, acis pilnībā pielāgojas tumšajai telpai pirms parauga novērošanas.
(3) Lai novērstu UV bojājumus acīm, regulējot gaismas avotu, jāvalkā aizsargbrilles.
(4) Pārbaudes laikam katru reizi ir jābūt 1-2 stundām. Ja tas pārsniedz 90 minūtes, ultraaugstspiediena dzīvsudraba spuldzes gaismas intensitāte pakāpeniski samazinās un fluorescence vājinās; Pēc ultravioletā starojuma iedarbības 3-5 minūtes parauga fluorescence arī ievērojami samazinājās; Tāpēc tas nedrīkst pārsniegt 2-3 stundas.
(5) Fluorescējošā mikroskopa gaismas avota kalpošanas laiks ir ierobežots, un paraugs ir jāpārbauda centralizēti, lai ietaupītu laiku un aizsargātu gaismas avotu. Kad laiks ir karsts, jāpievieno elektriskais ventilators, lai izkliedētu siltumu un atdzesētu. Nomainot jaunu spuldzi, lietošanas laiks jāreģistrē no sākuma. Kad spuldze ir izslēgta un to vēlas atkal izmantot, pirms aizdedzināšanas tai ir jāgaida, līdz spuldze pilnībā atdziest. Izvairieties no gaismas avota vairākas reizes aizdedzināšanas.
(6) Novērojiet paraugu tūlīt pēc krāsošanas, jo fluorescence laika gaitā pakāpeniski samazinās. Ja paraugs tiek uzglabāts polietilēna plastmasas maisiņā 4 grādu temperatūrā, tas var aizkavēt fluorescences vājināšanās laiku un novērst montāžas līdzekļa iztvaikošanu.
(7) Sprieduma standarts fluorescences spilgtumam parasti ir sadalīts četros līmeņos, proti, "viens" — nav vai ir redzama vāja fluorescence. plus - Var redzēt tikai skaidri redzamu fluorescenci. plus plus - Redzams ar spilgtu fluorescenci. "plus plus plus" - redzama un žilbinoša fluorescence.
