Vairākas piezīmes un padomi fāzes kontrasta mikroskopijas lietošanai
Fāzes kontrasta mikroskopijas izmantošana
1) Uzstādiet fāzes kontrasta ierīci: noņemiet parastā mikroskopa kondensatora lēcu un uzstādiet kondensatora lēcu ar gredzenveida diafragmu uz atbilstoša mikroskopa; noņemiet parasto mikroskopa objektīvu un nomainiet to pret objektīvu ar fāzes plāksni; nomainiet okulāru ar Fokusēšanas okulāriem fāzes kontrasta mikroskopiem; pie gaismas avota gaismas ieejas ir novietoti speciāli zaļie filtri (dažreiz nav nepieciešami).
2) Gaismas izlīdzināšana un fokuss: noregulējiet fokusēšanas okulāru un biezuma regulēšanas skrūvi, līdz redzes laukā ir skaidri redzams balts aplis un melns aplis. Melnais aplis ir fiksēts, un balto apli var pārvietot, regulējot kondensatora ierīces skrūvi, lai melnais aplis un baltais aplis pilnībā sakristu. Lai pārbaudītu, noņemiet fokusēšanas okulāru un nomainiet to ar oriģinālo mikroskopa okulāru.
Fāzu kontrasta mikroskopa lietošanas problēmu analīze
1. Parauga biezuma ietekme Veicot fāzes kontrasta novērošanu, parauga biezumam jābūt 5 μm vai plānākam. Izmantojot biezāku paraugu, parauga augšējais slānis ir ļoti dzidrs, bet dziļais slānis būs izplūdis un radīs fāzes nobīdes traucējumus. un gaismas izkliede.
2. Segstikla un bīdāmā stikla ietekme Paraugam jābūt pārklātam ar vāku, pretējā gadījumā gredzenveida diafragmas gaišais gredzens un fāzes plāksnes tumšais gredzens ir grūti pārklājas. Fāzes kontrasta novērošanai ir arī augstas prasības attiecībā uz bīdāmā stikla un vāka stikla kvalitāti. Ja ir skrāpējumi, nevienmērīgs biezums vai nelīdzenums, rodas spilgti gredzena kropļojumi un fāzes traucējumi. Turklāt, ja slaids ir pārāk biezs vai pārāk plāns, gredzenveida diafragmas spilgtais gredzens kļūs lielāks vai mazāks.
3. Halo un izbalēšanas efekts Fāzu kontrasta mikroskopa attēlveidošanas procesā, kad noteikta struktūra kļūst tumša fāzes aizkaves dēļ, tas nav gaismas zudums, bet gan gaismas pārdales rezultāts attēla plaknē. Tātad gaisma, kas acīmredzami tiek zaudēta tumšos apgabalos, parādīsies kā spilgts oreols ap tumšākiem objektiem. Tas ir fāzes kontrasta mikroskopijas trūkums, kas kavē smalku struktūru novērošanu, un halo parādība ir nopietnāka, ja gredzenveida diafragma ir ļoti šaura. Vēl viena fāzes kontrasta mikroskopijas parādība ir ēnojuma efekts, kas attiecas uz kontrasta zudumu lielāka laukuma malās ar tādu pašu fāzes aizkavi, ja to novēro ar fāzes kontrastu.
4. Fāzes inversija Kad n'n, attēla gaišais un tumšais kontrasts ir tieši pretējs, ko sauc par fāzes inversiju. Tas nav atpazīstams, kad fāzes starpība δ=0, un kontrasts kļūst lielāks, palielinoties δ, un fāzes inversija parādīsies, kad δ turpina palielināties līdz noteiktai vērtībai. Izmantojot 90 procentu augstas absorbcijas vērtības (augsta kontrasta) objektīvu, šī transformācijas vērtība ir aptuveni 0,55 λ, un, izmantojot 70 procentu standarta absorbcijas vērtības objektīvu, tā ir aptuveni 0,33 λ . Lai atrisinātu mazākas optiskā ceļa atšķirības, jāizmanto mērķi ar augstākām absorbcijas vērtībām.
