Fluorescences mikroskopa lietošanas prasmes un metodes
Fluorescences mikroskopa tehniskie parametri 1. Platleņķa okulārs 2. Ahromatiskais objektīvs 3. Četru caurumu objektīva pārveidotājs 4. Izstarojoša fluorescences ierīce zila (b) zaļa (g) ierosmes sistēma 100W dzīvsudraba lampa 5. Koaksiālā rupja mikrofokusēšanas mehānisms: fokusēšanas diapazons 15 mm, mikrorežģa vērtība 0,002 mm 6. Divslāņu mehāniskā darbagalda garenvirziena pārvietošanās diapazons: 70 mm, sānu kustības diapazons: 50 mm.
Fluorescences mikroskopa lietošanas prasmes un metodes
(1) stikla priekšmetstikliņi
Slaida biezumam jābūt no 0.8-1,2 mm līdz 1,2 mm. Pārāk biezs priekšmetstiklis neuzsūks daudz gaismas, no vienas puses, un, no otras puses, neliks ierosmes gaismai uzkrāties uz parauga. Priekšmetstikliņam jābūt gludam, vienāda biezuma un bez acīmredzamas spontānas fluorescences. Dažreiz ir nepieciešami Shi Ying stikla priekšmetstikliņi.
(2) Nosedzošais stikls
Pārsega stikls ir aptuveni 0,17 mm biezs un gluds. Lai pastiprinātu ierosmes gaismu, var izmantot arī interferences pārklājuma stiklu, kas ir sava veida īpašs pārklājošais stikls ar vairākiem vielu (piemēram, magnija fluorīda) slāņiem, kuriem ir dažāda traucējumu ietekme uz dažādiem gaismas viļņa garumiem. Tas var nodrošināt, ka fluorescence iziet vienmērīgi un atspoguļo ierosmes gaismu, un šī atstarotā ierosmes gaisma var ierosināt paraugu.
(3) Paraugi
Audu sekcijas vai citi paraugi nedrīkst būt pārāk biezi. Ja tas ir pārāk biezs, lielākā daļa ierosmes gaismas tiek patērēta parauga apakšējā daļā, savukārt augšējā daļa, ko tieši novēro objektīva lēca, nav pilnībā ierosināta. Turklāt šūnu pārklāšanās vai piemaisījumu maskēšana ietekmē spriedumu.
(4) blīvēšanas līdzeklis
Glicerīnu parasti izmanto kā blīvēšanas līdzekli, kam jābūt bezkrāsainam un caurspīdīgam bez spontānas fluorescences. Fluorescences spilgtums ir spilgts pie pH 8,5 ~ 9,5, un to nav viegli ātri izbalināt. Tāpēc kā blīvēšanas līdzeklis bieži tiek izmantots līdzvērtīgs glicerīna un 0,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5 karbonāta buferšķīduma maisījums.
(5) spoguļu eļļa
Parasti, novērojot paraugus ar tumšā lauka fluorescences mikroskopu un eļļas spoguli, ir jāizmanto spoguļeļļa. Vislabāk ir izmantot īpašu nefluorescējošu spoguļeļļu, vai tā vietā var izmantot iepriekš minēto glicerīnu. Var izmantot arī šķidro parafīnu, taču laušanas koeficients ir zems, kas nedaudz ietekmē attēla kvalitāti.
