Krāsošanas paņēmieni un mikroorganismu mikroskopiskā novērošana
Vienkārša baktēriju krāsošana
1 Mērķi
1.1. Apgūt mikrobu uztriepes un krāsošanas pamatmetodes.
1.2. Apgūt vienkāršu baktēriju krāsošanas metodi.
1.3. Izzināt baktēriju morfoloģiskās īpašības un nostiprināt eļļas spoguļa lietošanas un aseptiskās darbības tehnikas apguvi.
2 Princips Baktēriju uztriepes un krāsošana ir mikrobioloģijas eksperimentu pamatmetode. Baktēriju šūnas ir mazas un caurspīdīgas, tās nav viegli atpazīt zem parastā gaismas mikroskopa, un tās ir jānokrāso. Vienas krāsvielas izmantošana baktēriju iekrāsošanai, lai iekrāsotais organisms un fons veidotu skaidru krāsu atšķirību, lai varētu skaidrāk novērot to morfoloģiju un struktūru. Šī metode ir viegli izpildāma un piemērota organisma vispārējās formas un baktēriju izkārtojuma novērošanai. Sārmainās krāsvielas parasti izmanto vienkāršai krāsošanai, jo neitrālos, sārmainos vai vāji skābos šķīdumos baktēriju šūnas parasti ir negatīvi lādētas, un, ja sārmainās krāsvielas tiek jonizētas, to molekulu krāsojošā daļa ir pozitīvi uzlādēta, tāpēc sārmainu krāsvielu krāsojošā daļa. var viegli saistīties ar baktērijām, padarot baktērijas krāsotas. Iekrāsotās baktēriju šūnas krasi kontrastē ar fonu, un tās ir vieglāk atpazīt zem mikroskopa. Parasti izmantotās krāsvielas vienkāršai krāsošanai ietver merociānzilo, kristālvioleto un pamata savienojumu sarkano. Cukura baktēriju sadalīšanās laikā, lai iegūtu skābi, lai samazinātu barotnes pH, palielinās baktēriju pozitīvais lādiņš, un pēc tam to var izmantot sarkanā, skābā sarkanā vai Kongo sarkanā un citu skābo krāsvielu krāsošanai. Pirms krāsošanas baktērijas ir jānostiprina. Tam ir divējāds mērķis: viens ir iznīcināt baktērijas un likt tām pielipt priekšmetstikliņam; otrs ir palielināt tā afinitāti pret krāsvielu. Parasti tiek izmantotas divas metodes: karsēšana un ķīmiskā fiksācija. Fiksējot, mēģiniet saglabāt šūnu sākotnējo morfoloģiju.
3 Materiāli
3.1. Celms Bacillus subtilis 12-18h barības vielu agara slīpā kultūra, Staphylococcus aureus aptuveni 24h barības agara slīpkultūra, Escherichia coli 24h barības agara slīpkultūra, maizes rauga agara slīpā kultūra.
3.2. Notraipīt Lue sārmainā metilēnzilā traipu (vai amonija oksalāta kristālvioleto traipu), karbolskābes savienojuma sarkano traipu.
3.3 Instrumenti vai citi piederumi Mikroskops, spirta lampa, priekšmetstikliņi, inokulācijas gredzens, priekšmetstikliņu turētājs, divslāņu pudele (piepildīta ar ciedra eļļu un ksilolu), mikroskopa papīrs, fizioloģiskais šķīdums vai destilēts ūdens utt.
4 Procedūra Uztriepe → žāvēšana → fiksācija → krāsošana → mazgāšana → žāvēšana → mikroskopiskā izmeklēšana.
5 soļi
5.1. Uztriepe Paņemiet divus tīrus un bez eļļas priekšmetstikliņus, katrs ar nelielu pilienu fizioloģiskā šķīduma (vai destilēta ūdens) priekšmetstikliņa centrā aseptiskos apstākļos, ar inokulācijas gredzenu, lai aseptiski darbinātu attiecīgi no Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus. un Escherichia coli slīpi, lai ūdens pilē paņemtu nedaudz sūnu, sajaucot un pārklājot ar plēvi. Ja baktēriju suspensijas (vai šķidrās kultūras) uztriepes, var izmantot, lai inokulētu gredzenu, izvēlieties 2 līdz 3 gredzenus tieši uz priekšmetstikliņa. Ņemiet vērā, ka fizioloģiskā šķīduma (destilēta ūdens) un ņemt baktērijas nedrīkst būt pārāk daudz un izplatīties vienmērīgi, ne pārāk bieza.
5.2. Žāvēšana Žāvējiet dabiski istabas temperatūrā. To var arī žāvēt, nedaudz karsējot virs spirta lampas ar pārklāto pusi uz augšu. Tomēr netuvojieties liesmai pārāk tuvu, jo pārāk augsta temperatūra iznīcinās baktēriju morfoloģiju.
5.3 Fiksācija Ja tiek izmantota karstuma žāvēšana, fiksācija un žāvēšana tiek apvienota vienā solī tāpat kā žāvēšana. Izsmērēt, nosusināt un termiski fiksēt.
5.4. Krāsošana Novietojiet priekšmetstikliņu plakaniski uz priekšmetstikliņu plaukta, pievienojiet 1 līdz 2 pilienus krāsošanas šķīduma uz uztriepes (krāsošanas šķīdums tikai nosedz uztriepes plēvi). Nokrāsojiet uztriepi ar Lü's Basic Mellanox Blue 1–2 minūtes un ar karbonātsarkano (vai amonija oksalāta kristālvioleto) apmēram 1 minūti.
5.5. Skalošana Nolejiet krāsošanas šķīdumu un uzmanīgi noskalojiet ar krāna ūdeni no viena priekšmetstikliņa gala, līdz ūdens, kas tek no uztriepes, ir bezkrāsains. Skalojot, neļaujiet ūdenim plūst tieši, lai nomazgātu pārklāto virsmu. Ūdens plūsma nedrīkst būt pārāk strauja vai pārāk liela, lai izvairītos no uztriepes plēves pārvietošanas.
5.6. Žāvēšana Nokratiet ūdens pilienus uz priekšmetstikliņa, lai tie dabiski izžūtu, sausu uzsūkšanai var izmantot ar fēnu vai absorbējošu papīru (uzmanieties, lai nenoslaucītu baktēriju ķermeni). 5.7. Mikroskopiskā pārbaude Uztriepi žāvē un pārbauda ar mikroskopiju. Uztriepei jābūt pilnībā sausai, lai to varētu novērot ar eļļas mikroskopu.
6 Rezultāti Uzzīmējiet E. coli un Micrococcus garciniae morfoloģiju pēc vienas krāsošanas.
Grama traips
1 Mērķis
1.1. Izprast Grama krāsojuma principu un tā nozīmi baktēriju klasifikācijā un identificēšanā.
1.2. Apgūt un apgūt Grama krāsošanas tehniku un nostiprināt gaismas mikroskopa eļļas lēcas lietošanas apguvi.
