Stereo fluorescences mikroskopa lietošana un piesardzības pasākumi
Instrukcijas:
(1) Novietojiet materiāla lapu uz skatuves.
(2) Ieslēdziet fluorescējošā mikroskopa sprieguma stabilizatoru. Pēc tam nospiediet starta grupu, lai aizdedzinātu UV lampu, un neizslēdziet to 15 minūšu laikā un neiedarbiniet to vēlreiz 3 minūšu laikā pēc izslēgšanas.
(3) Pagrieziet ierosmes filtru uz v, krāsu atdalīšanas filtru uz v un atlasiet 495 vai 475 nm bloķējošo filtru.
(4) Mikroskopiskai izmeklēšanai izvēlieties fluorescējošu objektīvu mikroskopu uvFL40, uvFL100.
(5) Uz priekšmetstikliņa pievienojiet nefluorescējošu eļļu, vispirms izmantojiet 40x un pēc tam izmantojiet 100x fokusēšanas mikroskopu, lai pārbaudītu. Parādās fluorescence.
(7) Tā kā fluorescējošu vielu fluorescence ar laiku pakāpeniski vājinās, kad tās tiek apstarotas ar ultravioleto gaismu, mikroskopiskās izmeklēšanas laikā redzes lauks ir bieži jāmaina.
(8) Materiālu pārbaudei var izmantot arī mikroskopus uvFL10 vai uvFL20 ar zemu palielinājumu (lietojot mazjaudas lēcas, netiek pievienota fluorescējoša eļļa).
Fluorescences attēla ierakstīšanas metode:
Fluorescences mikroskopā redzamajam fluorescences attēlam ir gan morfoloģiskās īpašības, gan fluorescences krāsa un spilgtums. Vērtējot rezultātus, tie abi ir jāapvieno visaptverošam spriedumam. Rezultāti tiek reģistrēti, pamatojoties uz subjektīviem rādītājiem, tas ir, darbinieku vizuālo novērojumu. Kā vispārējs kvalitatīvs novērojums, pamatā uzticams. Attīstoties tehnoloģijām un zinātnei, tiek izmantoti objektīvi rādītāji, lai reģistrētu sprieduma rezultātus dažādās pakāpēs, piemēram, šūnu spektrofotometrus, attēlu analizatorus un citus instrumentus. Tomēr ar šiem instrumentiem reģistrētie rezultāti ir jāapvieno arī ar subjektīviem spriedumiem.
Fluorescences mikroskopa fotografēšana ir ļoti nepieciešama fluorescences attēlu ierakstīšanai. Tā kā fluorescence ir viegli izbalināta un vājināta, rezultāti ir jāreģistrē reāllaikā. Metode būtībā ir tāda pati kā parastajā mikrofotogrāfijā. Vienkārši jāizmanto ātrdarbīga gaismjutīga plēve, piemēram, ASA200 vai augstāka vai 24. augstāka. Tā kā ultravioletajai gaismai ir spēcīga ietekme uz fluorescences slāpēšanu, piemēram, FITC marķieriem, fluorescences spilgtums samazināsies par 50 procentiem, ja to apstaro ar ultravioleto gaismu 30 s. Tāpēc, ja ekspozīcijas ātrums ir pārāk zems, fluorescējošu attēlu nevar uzņemt. Vispārējās pētniecības fluorescences mikroskopiem ir pusautomātiskas vai pilnībā automātiskas fotomikrogrāfijas sistēmas ierīces.
Piesardzības pasākumi:
(1) Strādājiet stingri saskaņā ar fluorescences mikroskopa rūpnīcas instrukciju prasībām un nemainiet programmu pēc vēlēšanās.
(2) Pārbaude jāveic tumšā telpā. Pēc ieiešanas tumšajā telpā pievienojiet strāvas padevi un iededziet īpaši augsta spiediena dzīvsudraba lampu 5-15 minūtes. Kad gaismas avota spēcīgā gaisma ir stabila, acis pilnībā pielāgojas tumšajai telpai un pēc tam sāk novērot paraugu.
(3) Lai ultravioletie stari nesabojātu acis, regulējot gaismas avotu, jāvalkā aizsargbrilles.
(4) Pārbaudes laiks ir vēlams 1-2 stundas katru reizi. Ja tas pārsniedz 90 minūtes, ultraaugstspiediena dzīvsudraba spuldzes gaismas intensitāte pakāpeniski samazināsies un fluorescence vājinās; pēc tam, kad paraugs ir apstarots ar ultravioletajiem stariem 3-5 minūtes, arī fluorescence tiks ievērojami vājināta; tāpēc tas nedrīkst pārsniegt 2-2 stundas. 3h.
(5) Fluorescences mikroskopa gaismas avota kalpošanas laiks ir ierobežots, un paraugi ir jāpārbauda kolektīvi, lai ietaupītu laiku un aizsargātu gaismas avotu. Kad laiks ir karsts, jāpievieno ventilatori, lai izkliedētu siltumu, un jaunās spuldzes jāreģistrē no to lietošanas laika sākuma. Ja vēlaties to izmantot vēlreiz pēc tam, kad spuldze ir nodzisusi, pirms spuldzes iedegšanas uzgaidiet, līdz spuldze ir pietiekami atdzisusi. Izvairieties no gaismas avota iedegšanas vairākas reizes dienā.
(6) Novērojiet paraugu tūlīt pēc krāsošanas, jo fluorescence laika gaitā pakāpeniski vājinās. Ja paraugs tiek glabāts polietilēna plastmasas maisiņā 4 grādu temperatūrā, fluorescences pavājināšanās laiks var tikt aizkavēts un montāžas līdzekļa iztvaikošana var tikt novērsta.
(7) Fluorescences spilgtuma sprieduma standarts: tas parasti ir sadalīts četros līmeņos, tas ir, "viens" - var redzēt, ka fluorescence nav vai ir vāja. " plus "— var redzēt tikai skaidri redzamu fluorescenci. "plus plus" — redzams un spilgts
