Atšķirība starp lāzera konfokālo mikroskopu un tradicionālo optisko mikroskopu
Lāzerskenējošā konfokālā fluorescences mikroskopija ir salīdzinoši progresīvs molekulārās un šūnu bioloģijas analīzes instruments, kas izmanto datoru, lāzeru un attēlu apstrādes tehnoloģijas, lai iegūtu bioloģisko paraugu trīsdimensiju datus. To galvenokārt izmanto, lai novērotu dzīvo šūnu struktūru un noteiktu molekulu un jonu bioloģiskās izmaiņas, kvantitatīvo analīzi un reāllaika kvantitatīvo noteikšanu.
Lāzera konfokālās mikroskopijas princips: izmantojiet apgaismojuma caurumu, kas novietots aiz gaismas avota, un noteikšanas caurumu, kas novietots detektora priekšā, lai realizētu punktu apgaismojumu un punktu noteikšanu. Gaisma, ko izstaro no gaismas avota caur apgaismojuma caurumu, tiek fokusēta uz punktu parauga fokusa plaknē, un no šī punkta izstarotā fluorescence tiek attēlota noteikšanas caurumā, un jebkura izstarotā gaisma ārpus šī punkta tiek bloķēta. pinhole. Apgaismojuma caurums un noteikšanas adatas caurums ir konjugēti ar apstaroto punktu vai atklāto punktu, tāpēc noteiktais punkts ir konfokālais punkts, un plakne, kurā atrodas noteiktais punkts, ir konfokālā plakne.
Dators parāda atklātos punktus datora ekrānā attēla punktu veidā. Lai ģenerētu pilnīgu attēlu, skenēšanas sistēma optiskajā ceļā skenē parauga fokusa plakni, lai izveidotu pilnīgu konfokālo attēlu. Kamēr posms pārvietojas uz augšu un uz leju pa Z asi, jauns parauga slānis tiek pārvietots uz konfokālo plakni, un monitorā tiek attēlots jaunais parauga slānis. Ar nepārtrauktu Z ass kustību var iegūt dažādu parauga slāņu nepārtrauktus attēlus. Viegla griezuma attēls.
Atšķirība starp tradicionālajiem gaismas mikroskopiem
Tradicionālajiem fluorescences mikroskopiem ir nepārvarams trūkums: fluorescējošās struktūras ārpus fokusa plaknes ir izplūdušas un izplūdušas. Iemesls ir tāds, ka lielākajai daļai bioloģisko paraugu struktūras pārklājas. Ja fluorescējoši iezīmētās struktūras ir sadalītas dažādos līmeņos un pārklājas, objektīva lēca uztver arī izkliedēto fluorescenci no augšas vai zem fokusa plaknes, un fluorescences mikroskopa izšķirtspēja tiks ievērojami uzlabota. samazināt.
Pamatojoties uz tradicionālajiem optiskajiem mikroskopiem, lāzera skenēšanas konfokālie mikroskopi izmanto lāzera gaismu kā gaismas avotu, izmanto konjugāta fokusēšanas principu un ierīci un izmanto datorus, lai veiktu digitālo attēlu apstrādi, novērošanu, analīzi un novēroto objektu izvadi. Paraugu var tomogrāfiski skenēt un attēlot šūnu trīsdimensiju telpiskās struktūras nesagraujošai novērošanai un analīzei. Tajā pašā laikā, izmantojot imunofluorescējošās marķēšanas un jonu fluorescējošās marķēšanas zondes, šī tehnoloģija var ne tikai novērot fiksētas šūnas un audu sekcijas, bet arī veikt reāllaika dinamisku novērošanu un dzīvo šūnu struktūras, molekulu, jonu un dzīvības aktivitāšu noteikšanu, subcelulārā līmenī Novērojot fizioloģiskos signālus, piemēram, Ca2 plus , pH vērtību, membrānas potenciālu un izmaiņas šūnu morfoloģijā, ir kļuvusi par jaunas paaudzes spēcīgiem pētniecības instrumentiem morfoloģijas, molekulāro šūnu bioloģijas, neirozinātnes, farmakoloģijas un ģenētikas jomās.
