Fluorescences mikroskopa mērķis, atribūti un izmantošana
Fluorescences mikroskopa darbības princips un strukturālās īpašības: fluorescences mikroskops izmanto punktveida gaismas avotu ar augstu gaismas efektivitāti, lai izstarotu noteiktu gaismas viļņa garumu (piemēram, ultravioleto gaismu 3650 collu vai purpursarkano zilo gaismu 4200 collas) caur filtru sistēmu kā ierosmi. gaisma, lai stimulētu fluorescenci paraugā. Pēc tam, kad viela izstaro dažādu krāsu fluorescenci, to novēro, palielinot objektīva lēcu un okulāru. Tādā veidā zem spēcīga kontrasta fona, pat ja fluorescence ir ļoti vāja, to ir viegli identificēt un tam ir augsta jutība. To galvenokārt izmanto šūnu struktūras un funkcijas un ķīmiskā sastāva izpētei. Fluorescences mikroskopa pamatstruktūru veido parasts optiskais mikroskops un daži piederumi (piemēram, dienasgaismas gaismas avots, ierosmes filtrs, divu krāsu staru sadalītājs un bloķējošs filtrs utt.). Fluorescējošas gaismas avots — parasti izmanto īpaši augsta spiediena dzīvsudraba lampu (50-200W), kas var izstarot dažāda viļņa garuma gaismu, taču katrai fluorescējošai vielai ir ierosmes viļņa garums, kas rada visspēcīgāko fluorescenci, tāpēc ierosmes filtrs (parasti ir ultravioletie, purpursarkanie, zilie un zaļie ierosmes filtri), kas ļauj tikai noteikta viļņa garuma ierosmes gaismai iziet cauri un apstarot paraugu, vienlaikus absorbējot citu gaismu. Pēc tam, kad katra viela ir apstarota ar ierosmes gaismu, tā ļoti īsā laikā izstaro redzamu fluorescenci ar garāku viļņa garumu nekā apstarošanas viļņa garums. Fluorescence ir specifiska un parasti vājāka nekā ierosmes gaisma. Lai novērotu specifisku fluorescenci, aiz objektīva ir nepieciešams bloķējošs (vai nomācošs) filtrs.
Tam ir divas funkcijas: viena ir absorbēt un bloķēt ierosmes gaismas iekļūšanu okulārā, lai netraucētu fluorescenci un nebojātu acis; otrs ir atlasīt un ļaut iziet cauri konkrētajai fluorescencei, parādot noteiktu fluorescējošu krāsu. Abi filtri ir jāizmanto kopā.
Ir divu veidu fluorescences mikroskopi, ņemot vērā to optiskos ceļus:
1. Transmisijas fluorescences mikroskops: ierosmes gaismas avots tiek izvadīts cauri parauga materiālam caur kondensatora lēcu, lai ierosinātu fluorescenci. Parasti tiek izmantots tumšā lauka kolektors, un parasto kolektoru var izmantot arī, lai noregulētu spoguli tā, lai ierosmes gaisma tiktu novirzīta un apieta uz paraugu. Šis ir vecāks fluorescējošais mikroskops. Priekšrocība ir tāda, ka fluorescence ir spēcīga pie maza palielinājuma, bet trūkums ir tas, ka fluorescence samazinās, palielinoties palielinājumam. Tāpēc labāk ir novērot lielākus materiālu paraugus.
2. Epifluorescences mikroskops ir jauna veida fluorescences mikroskops, kas izstrādāts mūsdienās. Atšķirība ir tāda, ka ierosmes gaisma nokrīt no objektīva lēcas uz leju līdz parauga virsmai, tas ir, to pašu objektīvu izmanto kā apgaismojuma kondensatoru un objektīvu fluorescences savākšanai. Gaismas ceļā, kas atrodas 45 grādu attālumā no gaišā urāna, jāpievieno dihroiskais staru sadalītājs. Uzbudinājuma gaisma tiek atspoguļota objektīva lēcā un tiek savākta paraugā. Fluorescence, ko rada paraugs, un ierosmes gaisma, ko atstaro objektīva lēcas virsma un pārklājuma stikla virsma, vienlaikus nonāk objektīva lēcā un atgriežas divu krāsu staru sadalītājā, lai radītu ierosmes gaismu. Atdalīta no fluorescences. , atlikušo ierosmes gaismu absorbē bloķējošie filtri. Piemēram, pārejot uz dažādu ierosmes filtru / divu krāsu staru sadalītāja / bloķēšanas filtru kombināciju, tas var apmierināt dažādu fluorescējošu reakciju produktu vajadzības. Šāda veida fluorescences mikroskopa priekšrocība ir tāda, ka redzes lauka apgaismojums ir vienmērīgs, attēls ir skaidrs un jo lielāks palielinājums, jo spēcīgāka ir fluorescence.
(2) Kā lietot fluorescences mikroskopu.
1. Ieslēdziet gaismas avotu, un īpaši augsta spiediena dzīvsudraba spuldzei dažas minūtes jāiesilst, lai sasniegtu spožāko punktu.
2. Transmisijas fluorescences mikroskopam ir jāuzstāda nepieciešamais ierosmes filtrs starp gaismas avotu un kondensatoru un jāuzstāda attiecīgais bloķējošais filtrs aiz objektīva. Epifluorescences mikroskopiem optiskā ceļa spraugās ir jāievieto nepieciešamie ierosmes filtrs/divkrāsu staru sadalītāja/bloķējošā filtra ieliktņi.
3. Novērojiet ar zema palielinājuma objektīvu un noregulējiet gaismas avota centru tā, lai tas atrastos visa apgaismojuma vietas centrā saskaņā ar dažādu fluorescences mikroskopu modeļu regulēšanas ierīci.
4. Novietojiet parauga gabalu un novērojiet pēc fokusēšanas. Lietošanas laikā jāpievērš uzmanība: nevērojiet tieši ar gala filtru, lai nesabojātu acis; novērojot paraugus ar eļļas lēcu, jāizmanto īpaša eļļas lēca bez fluorescences; pēc augstspiediena dzīvsudraba spuldzes izslēgšanas to nevar uzreiz atkal ieslēgt, tā ir jāpārbauda. To var restartēt pēc 5 minūtēm, pretējā gadījumā tas būs nestabils un ietekmēs dzīvsudraba lampas kalpošanas laiku.
(3) Novērošana Izmantojot zili violetu gaismas filtru zem fluorescējošā mikroskopa mācību platformā, var redzēt, ka o. 01 procents šūnu, kas iekrāsotas ar akridīna oranžu fluorescējošu krāsu, kodols un citoplazma tiek satraukti, lai radītu divas dažādas fluorescences krāsas (tumši zaļu un oranži sarkanu).
