Ir divu veidu fluorescences mikroskopi, kuru pamatā ir to optiskais ceļš:
1. Transmisijas fluorescences mikroskops: ierosmes gaismas avots tiek pārraidīts caur parauga materiālu caur kondensatoru, lai ierosinātu fluorescenci. Parasti izmantotos tumšā lauka gaismas kolektorus vai parastos gaismas kolektorus var izmantot, lai pielāgotu reflektoru, lai paraugā pārveidotu ierosmes gaismu un sānu gaismu. Šis ir salīdzinoši vecmodīgs fluorescences mikroskops. Tā priekšrocība ir tā, ka fluorescence ir spēcīga pie maza palielinājuma, savukārt tās trūkums ir tas, ka fluorescence vājinās, palielinoties palielinājumam. Tāpēc tas ir labāks lielāku paraugu materiālu novērošanai.
2. Krītošā stara fluorescences mikroskops Šis ir jauna veida fluorescences mikroskops, kas izstrādāts mūsdienās. Atšķirībā no iepriekšējās, ierosmes gaisma nokrīt no objektīva uz parauga virsmu, izmantojot to pašu objektīvu kā apgaismojuma kondensatoru un objektīva lēcu fluorescences savākšanai. Optiskajam ceļam, kas atrodas 45 grādu leņķī pret gaišo urānu, jāpievieno divu krāsu staru atdalītājs. Uzbudinājuma gaisma tiek atspoguļota objektīva lēcā un koncentrēta uz paraugu. Parauga radītā fluorescence, kā arī ierosmes gaisma, kas atstarojusies no objektīva lēcas un vāka stikla virsmas, vienlaicīgi nonāk objektīva lēcā un atgriežas dihromiskā stara separatorā, atdalot ierosmi un fluorescenci. Pēc tam atlikušo ierosmi absorbē bloķējošais filtrs. Ja tiek izmantoti dažādi ierosmes filtri/divkrāsu staru atdalītāji/bloķējošo filtru kombinācijas, tie var apmierināt dažādu fluorescējošu reakciju produktu vajadzības. Šī fluorescējošā mikroskopa priekšrocība ir tāda, ka redzes lauka apgaismojums ir vienmērīgs, attēls ir skaidrs un jo lielāks palielinājums, jo spēcīgāka ir fluorescence.
(2) Fluorescences mikroskopa izmantošana
1. Ieslēdziet gaismas avotu, un īpaši augsta spiediena dzīvsudraba lampa ir jāuzsilda dažas minūtes, lai tā sasniegtu savu maksimumu.
2. Transmisijas fluorescences mikroskopam starp lampas avotu un kondensatoru ir jāuzstāda nepieciešamais ierosmes filtrs un aiz objektīva lēcas ir jāuzstāda attiecīgais bloķējošais filtrs. Krītošā stara fluorescences mikroskopam ir jāievieto nepieciešamais ierosmes filtrs/divkrāsu staru atdalītājs/bloķējošā filtra bloks optiskā ceļa spraugā.
3. Novērojiet ar mazjaudas mikroskopu un noregulējiet gaismas avota centru atbilstoši dažādu fluorescences mikroskopu modeļu regulēšanas ierīcēm tā, lai tas atrastos visa apgaismojuma punkta centrā.
4. Novietojiet parauga šķēles un fokusējiet tās, lai novērotu. Lietošanas laikā jāņem vērā, ka gala filtru nedrīkst tieši novērot ar acīm, lai izvairītos no acu bojājumiem; Vērojot paraugus ar eļļas mikroskopu, jāizmanto īpašs nefluorescējošas eļļas mikroskops; Pēc augstspiediena dzīvsudraba spuldzes izslēgšanas to nevar uzreiz atkal ieslēgt. Lai sāktu no jauna, ir nepieciešamas 5 minūtes, pretējā gadījumā tas būs nestabils un ietekmēs dzīvsudraba lampas kalpošanas laiku.
(3) Vērojot fluorescences mikroskopā mācību platformā, izmantojot zili violetu gaismas filtru, var redzēt, ka šūnas, kas iekrāsotas ar 0,01 procentiem akridīna oranžas fluorescējošas krāsas, kodols un citoplazma tiek stimulēti, lai radītu divas dažādas fluorescences krāsas (tumši zaļa un oranža sarkana).
