Fluorescences mikroskopijas izmantošana: metodes un prasmes
Fluorescences mikroskopa tehniskie parametri 1. Platleņķa okulārs 2. Ahromatiskā objektīva lēca 3. Četru caurumu objektīva lēcas pārveidotājs 4. Epi-fluorescējoša ierīce Zila (B) Zaļa (G) ierosmes sistēma 100W dzīvsudraba lampa 5. Koaksiālais rupjā un smalkā fokusa regulēšanas mehānisms: regulēšana Fokusa diapazons: 15mm Mikrokustības režģa vērtība: 0,002mm 6. Divslāņu mehāniskais galds Garenvirziena kustības diapazons: 70mm Sānu kustības diapazons: 50mm
Izmantojiet prasmju metodi
(1) Stikla priekšmetstiklis
Stikla priekšmetstikliņa biezumam jābūt no 0,8 līdz 1,2 mm. Pārāk biezs priekšmetstiklis absorbēs vairāk gaismas, no vienas puses, un, no otras puses, ierosmes gaismu nevar koncentrēt uz parauga. Priekšmetstikliņiem jābūt gludiem, vienāda biezuma un bez acīmredzamas autofluorescences. Dažreiz tiek izmantoti kvarca stikla priekšmetstikliņi.
(2) Nosedzošais stikls
Pārsega stikla biezums ir aptuveni 0,17 mm, gluds. Lai pastiprinātu ierosmes gaismu, var izmantot arī interferences pārklājuma stiklu, kas ir speciāls pārklājuma stikls, kas pārklāts ar vairākiem vielu slāņiem (piemēram, magnija fluorīds), kam ir dažāda traucējumu ietekme uz dažāda viļņa garuma gaismu, kas var radīt fluorescence norit gludi. Aizraujoša gaisma tiek izlaista cauri un atspoguļota, un šī atstarotā ierosmes gaisma ierosina paraugu.
(3) Paraugs
Audu šķēles vai citi paraugi nedrīkst būt pārāk biezi. Ja tas ir pārāk biezs, lielākā daļa ierosmes gaismas tiks patērēta parauga apakšējā daļā, savukārt augšējā daļa, ko tieši novēro objektīva lēca, netiks pilnībā ierosināta. Turklāt spriedumu ietekmē šūnu pārklāšanās vai piemaisījumu pārklājums.
(4) Montāžas līdzeklis
Glicerīnu parasti izmanto kā stiprinājuma līdzekli, kam nedrīkst būt autofluorescences, tas ir bezkrāsains un caurspīdīgs, un fluorescences spilgtums ir spilgtāks pie pH 8.{1}}.5, un tas nav viegli ātri izbalināt. Tāpēc kā stiprinājuma līdzekli parasti izmanto vienādu glicerīna un 0,5 mol/l karbonāta buferšķīduma maisījumu ar pH no 9.0 līdz 9,5.
(5) spoguļu eļļa
Parasti, novērojot paraugus ar tumšā lauka fluorescences mikroskopiem un eļļas imersijas lēcām, ir jāizmanto imersijas eļļa. Vislabāk ir izmantot īpašu nefluorescējošu iegremdēšanas eļļu. Tā vietā var izmantot arī iepriekš minēto glicerīnu, kā arī šķidro parafīnu, taču laušanas koeficients ir zems, kas nedaudz ietekmē attēla kvalitāti. Ietekme.
