Kādu mikroskopu izmanto, lai redzētu mikrobu šūnu formu
Kolektīvs termins visiem sīkajiem organismiem, kurus indivīdiem ir grūti novērot ar neapbruņotu aci. Mikroorganismi ir baktērijas, vīrusi, sēnītes un dažas aļģes. (Tomēr daži mikroorganismi ir redzami ar neapbruņotu aci, piemēram, sēņu sēnes, Ganoderma lucidum u.c.) Vīrusi ir "nešūnu organismu" veids, kas sastāv no dažiem komponentiem, piemēram, nukleīnskābēm un olbaltumvielām, bet to izdzīvošanai ir jābūt atkarīgai no dzīvām šūnām. Atbilstoši dažādām pastāvošajām vidēm tos var iedalīt prokariotiskajos mikroorganismos, kosmosa mikroorganismos, sēnīšu mikroorganismos, rauga mikroorganismos, jūras mikroorganismos utt.
Mikroorganismu loma un kaitējums:
Viena no būtiskākajām mikroorganismu ietekmēm uz cilvēku ir infekcijas slimību izplatība. 50 procentus cilvēku slimību izraisa vīrusi. Mikrobu vēsture, kas izraisa cilvēku slimības, ir cilvēku pastāvīgās cīņas ar tiem vēsture. Cilvēki ir guvuši lielus panākumus slimību profilaksē un ārstēšanā, taču joprojām parādās jaunas un atkārtoti sastopamas mikrobu infekcijas, piemēram, liels skaits vīrusu slimību, kurām trūkst efektīvu terapeitisko zāļu. Dažu slimību patogēns mehānisms nav skaidrs. Liela skaita plaša spektra antibiotiku ļaunprātīga izmantošana ir izraisījusi spēcīgu selekcijas spiedienu, izraisot daudzu celmu mutāciju, izraisot zāļu rezistences rašanos, un cilvēku veselību apdraud jauni draudi. Daži segmentēti vīrusi var mutēt, veicot rekombināciju vai pārkārtojumu. Tipiskākais piemērs ir gripas vīruss.
Uzzinot konkrēto mikroorganismu definīciju, kāda veida mikroskopu eksperimentētājam vajadzētu izmantot, pētot mikroorganismus, lai redzētu, un kādu mikroskopu var izmantot, lai labāk redzētu, kā arī novērotu un analizētu parastās mikrobu formas.
Mikroskopa izgudrojums ir, lai varētu redzēt smaidošus objektus, kurus nevar redzēt ar neapbruņotu aci. Mikroorganismu izmēri ir ļoti mazi, tāpēc tie ir jāpalielina un jānovēro ar mikroskopa palīdzību. Turklāt ir daudz veidu mikroorganismu, tāpēc būtībā lielākā daļa optisko mikroskopu var Lai novērotu mikroorganismus, nākamais jautājums ir par to, kāda veida mikroskopu vajadzētu izmantot mikroorganismu novērošanai un analīzei. Parastie mikroskopi mikrobu morfoloģijas novērošanai ietver bioloģiskos mikroskopus, fāzes kontrasta mikroskopus, apgrieztos mikroskopus, fluorescences mikroskopus un konfokālos mikroskopus. Mikroskops un tā tālāk.
Tālāk ir aprakstīti dažādi mikroskopi, ko izmanto mikroorganismu novērošanai:
1. Parasts gaismas mikroskops
Dabiskā gaisma vai gaisma tiek izmantota kā gaismas avots, un tās viļņa garums ir aptuveni {{0}},4 μm. Mikroskopa izšķirtspēja ir puse no viļņa garuma, tas ir, 0,2 μm, un mazākais ar neapbruņotu aci redzamais attēls ir 0,2 mm. Tāpēc, izmantojot eļļas (imersijas) spoguli, lai palielinātu 1000 reižu, 0,2 μm daļiņas var palielināt līdz 0,2 mm, kas redzamas ar neapbruņotu aci. Parastos optiskos mikroskopus var izmantot baktēriju, aktinomicītu un sēnīšu novērošanai.
2. Darkfield mikroskopiju parasti izmanto, lai novērotu nekrāsotu mikrobu morfoloģiju un kustību. Pēc tam, kad parastajā mikroskopā ir uzstādīts tumšā lauka kondensators, gaisma nevar iekļūt tieši no vidus, un redzes lauks ir tumšs. Kad paraugs saņem slīpu gaismu no kondensatora malas, tas var tikt izkliedēts, tāpēc tumšā lauka fonā var novērot spilgtus mikroorganismus, piemēram, baktērijas vai spirohetas.
3. Fāzes kontrasta mikroskops Fāzes kontrasta mikroskops izmanto fāzu starpības plāksnes gaismas efektu, lai mainītu tiešās gaismas gaismas fāzi un amplitūdu, kā arī pārvērstu gaismas fāzes atšķirību gaismas intensitātes starpībā. Fāzu kontrasta mikroskopā, gaismai izejot cauri nekrāsotam paraugam, gaismas fāzes atšķirību izraisa dažādu parauga daļu blīvuma neatbilstība, un var novērot mikroorganismu morfoloģiju, iekšējo struktūru un kustības režīmu.
4. Fluorescences mikroskops Fluorescences mikroskops būtībā ir tāds pats kā parastais optiskais mikroskops, galvenā atšķirība ir gaismas avots, filtrs un kondensators. Pašlaik lielākā daļa no tiem izmanto epi-light ierīces, un augstspiediena dzīvsudraba spuldzes parasti izmanto kā gaismas avotus, kas var izstarot ultravioleto vai zili violeto gaismu. Ir divu veidu filtri: ierosmes filtrs un absorbcijas filtrs. Papildus vispārējiem spilgta lauka kondensatoriem fluorescences mikroskopos var izmantot arī tumšā lauka kondensatorus, izmantojot zilu gaismu, lai uzlabotu kontrastu starp fluorescenci un fonu. Šī metode ir piemērojama tādu baktēriju noteikšanai vai identificēšanai, kas iekrāsotas ar fluorescējošiem pigmentiem vai kombinētas ar fluorescējošām antivielām.
5. Elektronu mikroskopi izmanto elektronu plūsmu kā gaismas avotu. Salīdzinot ar redzamo gaismu, viļņa garums ir desmitiem tūkstošu reižu atšķirīgs, kas ievērojami uzlabo izšķirtspēju. Magnētiskā spole tiek izmantota kā optiskā pastiprināšanas sistēma, un palielinājums var sasniegt desmitiem tūkstošu vai simtiem tūkstošu reižu. To bieži izmanto vīrusu daļiņās. un baktēriju ultrastruktūras novērošana.
Nekrāsotu mikrobu paraugu novērošana:
Nekrāsotus paraugus parasti var izmantot, lai novērotu baktēriju morfoloģiju, spēku un kustību. Baktērijas ir bezkrāsainas un caurspīdīgas, ja tās nav iekrāsotas, un tās mikroskopā novēro galvenokārt pēc atšķirības starp baktēriju refrakcijas indeksu un apkārtējo vidi. Baktērijas ar flagellas enerģiski pārvietojas, savukārt baktērijas bez flagellas uzrāda neregulāru Brauna kustību. Dzīvotspējīgām baktērijām, piemēram, Treponema pallidum, Leptospira un Campylobacter, ir atšķirīgas formas un kustību modeļi, kam ir diagnostiska nozīme. Parasti izmantotās metodes ir spiediena krituma metode, piekaramā kritiena metode un kapilārā metode.
1. Piekāršanas metode Uzklājiet vazelīnu ap tīra ieliektā stikla priekšmetstikliņa ieliekto caurumu, paņemiet baktēriju suspensijas gredzenu ar inokulācijas cilpu un ievietojiet to vāka stikla centrā, pēc tam izlīdziniet ieliektā stikla priekšmetstikliņa ieliekto caurumu ar pilienu vāka stikla centrā un uzlieciet vāku, pēc tam ātri apgrieziet to otrādi, viegli nospiediet vāku, lai tas cieši pieliptu pie vazelīna ieliektā cauruma malā, un pēc tam novērojiet zem lielas jaudas mikroskops (vai tumšs lauks).
2. Paņemiet baktēriju suspensijas gredzenu ar inokulācijas cilpu un novietojiet to tīra stikla priekšmetstikliņa centrā, izmantojot spiediena krituma metodi, un uzmanīgi pārklājiet baktēriju suspensiju ar vāku, uzmanoties, lai izvairītos no gaisa burbuļu veidošanās un novērstu baktēriju suspensija no pārplūdes. Spilgtā lauka (vai tumšā lauka) novērojums zem lieljaudas objektīva.
3. Kapilāro metodi galvenokārt izmanto anaerobo baktēriju kinētikas izmeklēšanai. Parasti izvēlieties 60~70mm garumu. Pēc anaerobo baktēriju suspensijas izsūknēšanas caur kapilāru ar atvērumu 0.5-1,0 mm, noslēdziet abus kapilāra galus ar liesmu. Kapilārs tika fiksēts uz stikla priekšmetstikliņa ar plastmasas papīru un tika novērots zem lieljaudas objektīva tumšā laukā.
Krāsotu mikrobu paraugu novērošana ar mikroskopu:
Pēc tam, kad baktēriju paraugs ir iekrāsots, baktēriju un apkārtējās vides krasā kontrasta dēļ baktēriju un dažu īpašu struktūru morfoloģiskās īpašības (piemēram, izmērs, forma, izvietojums utt.) skaidri novērotas parastā optiskā mikroskopā (piemēram, kapsulās, flagellas, sporas utt.), un baktērijas var klasificēt un identificēt atbilstoši krāsošanas reaktivitātei.
(1) Baktēriju krāsošanas vispārīgā procedūra Vispārējā baktēriju krāsošanas procedūra ir: uztriepe (žāvēšana)-fiksācija-krāsošana.
1. Uztriepes Asins, sekrēciju, ekskrēciju, punkcijas šķidruma un šķidrās kultūras sagatavošana un tiešās plānās plēves uztriepes uz stikla priekšmetstikliņiem; autopsiju vai inficētu dzīvnieku audus, paraugu ņemšanai nosmērē bojājumu ar vates tamponu. Lai sagatavotu baktēriju kolonijas vai zālienu uz cietas barotnes, vispirms izmantojiet inokulācijas cilpu, lai paņemtu parastā fizioloģiskā šķīduma gredzenu un ievietotu to priekšmetstikliņa centrā, pēc tam izmantojiet sterilu inokulācijas cilpu, lai paņemtu nelielu kultūras daudzumu un to sasmalcinātu. vienmērīgi parastajā fizioloģiskā šķīdumā un izklājiet uz 1 cm2 lielām vai mazām krāsotām virsmām, ļaujiet tai dabiski nožūt istabas temperatūrā vai lēnām nožūt no attāluma.
2. Fiksācijas mērķis ir iznīcināt baktērijas, koagulēt baktēriju proteīnu un struktūru, kā arī atvieglot iekrāsošanos; veicināt baktēriju pieķeršanos priekšmetstikliņiem, lai mazgāšanas laikā tās neaizskalotu ar ūdeni; mainīt baktēriju caurlaidību pret krāsvielām, kas labvēlīgi ietekmē krāsojošo baktēriju šūnu struktūru. To parasti nostiprina, karsējot ar liesmu, un izžuvušo uztriepi ātri izlaiž cauri liesmai 3 reizes. Rokas aizmugures ādu labāk nededzināt, kad tā pieskaras slidkalniņam.
3. Krāsošana Atkarībā no dažādiem pārbaudes mērķiem izvēlieties dažādas krāsošanas metodes. Krāsojot, pa pilienam pievienojiet krāsas šķīdumu, lai palielinātu pārklājumu.
4. Kodinātājs Jebkuru vielu, kas var pastiprināt afinitāti starp krāsvielu un krāsoto objektu, nofiksēt krāsu uz krāsotā objekta un izraisīt šūnas membrānas caurlaidības izmaiņas, sauc par kodinātāju. Parasti izmanto alaunu, tanīnskābi, metālu sāļus un jodu utt., Krāsošanas veicināšanai tiek izmantota arī karsēšana. Kodinātājus var izmantot starp primāro krāsošanu un pretkrāsošanu, kā arī tos var lietot pēc fiksācijas vai ietvert fiksatorā un krāsošanā.
5. Atkrāsošana Jebkuru ķīmisku līdzekli, kas var noņemt krāsotā objekta krāsu, sauc par atkrāsotāju. Kā atkrāsotājus parasti izmanto etanolu, acetonu utt. Krāsošanas līdzeklis var noteikt baktēriju un krāsvielu kombinācijas stabilitātes pakāpi, ko var izmantot diferenciālai krāsošanai.
6. Pretkrāsošana Baktērijas vai to struktūras, kas ir atkrāsotas, bieži tiek iekrāsotas ar pretkrāsošanas šķīdumu, lai to būtu viegli novērot. Pretkrāsošanas šķīduma krāsa atšķiras no primārā krāsošanas šķīduma krāsas, lai veidotu asu kontrastu. Pretkrāsojums nedrīkst būt pārāk spēcīgs, lai neaizsegtu sākotnējā krāsojuma krāsu.
