Atšķirības un īpašības starp fluorescences mikroskopu un parasto optisko mikroskopu
Fluorescences mikroskops atšķiras no parastā optiskā mikroskopa. Tas nenovēro paraugu parastā gaismas avota apgaismojumā. Tā vietā tā izmanto noteikta viļņa garuma gaismu (parasti ultravioleto gaismu, zili violeto gaismu), lai ierosinātu fluorescējošo materiālu paraugā zem mikroskopa, liekot tam izstarot fluorescenci. Tāpēc fluorescences mikroskopa gaismas avots nekalpo kā tiešs apgaismojums, bet gan kā enerģijas avots, kas ierosina parauga iekšējo fluorescējošo materiālu. Iemesls, kāpēc mēs varam novērot paraugu, nav saistīts ar gaismas avota apgaismojumu, bet gan fluorescences fenomenu, ko izraisa fluorescējošais materiāls paraugā, kas absorbē ierosinātās gaismas enerģiju. Redzams, ka fluorescences mikroskopa galvenā īpašība ir tāda, ka tā gaismas avots var nodrošināt lielu ierosmes gaismas daudzumu noteiktā viļņu garuma diapazonā, lai fluorescējošās vielas pētāmajā paraugā varētu iegūt nepieciešamo ierosmes gaismas intensitāti. Tajā pašā laikā fluorescences mikroskopiem jābūt atbilstošām filtru sistēmām. Fluorescences mikroskopija ir būtisks rīks uzlabotai fluorescences histoķīmijai. Tas sastāv no īpaši augsta spiediena gaismas avota, filtru sistēmas (ieskaitot ierosmes un slāpēšanas filtra plāksnes), optiskās sistēmas un fotografēšanas sistēmas. Tas izmanto noteikta viļņa garuma gaismu, lai ierosinātu paraugu un izstaro fluorescenci.
1. Veidi, kā ierosināt fluorescenci: atkarībā no gaismas viļņa garuma diapazona to iedala divos veidos: UV ierosmes metode (izmantojot ultravioletā apgaismojuma metodi) un BV ierosmes metode (izmantojot zili violeto gaismu). UV ierosmes metode ierosināšanai izmanto gandrīz ultravioleto gaismu, kas ir īsāka par 400 nm. Šajā metodē nav redzamas ierosmes gaismas, tāpēc novērotā fluorescence parāda krāsvielai raksturīgo fluorescenci, ļaujot viegli atšķirt specifisko fluorescenci paraugā no fona audu autofluorescences.
2. BV ierosmes metode: ierosme no ultravioletās uz zilu gaismu, kuras centrs ir 404 nm un 434 nm. Šī metode izmanto zilu gaismu, lai apgaismotu paraugu, tāpēc fluorescences novērošanas sistēmas nogriešanas filtram ir jāizmanto filtrs, kas var pilnībā bloķēt zilo gaismu un pilnībā izturēt nepieciešamo zaļo un dzelteno fluorescenci. Fluorescējošās krāsvielas, ko izmanto fluorescējošu antivielu metodēs. Ierosinājuma gaismas maksimālais absorbcijas viļņa garums un fluorescences maksimālais emisijas viļņa garums ir relatīvi tuvu, tāpēc BV ierosmes metodē izmantotajam filtram ir jāizmanto asu nogriešanas filtrs. Šī metode var izmantot zilo gaismu kā ierosmes gaismu, tāpēc fluorescējošu pigmentu absorbcijas efektivitāte ir augstāka un var iegūt gaišākus attēlus. Trūkums ir tāds, ka fluorescence zem 500 nm nav redzama, savukārt fluorescence virs 500 nm padara visu attēlu dzeltenu. Fluorescējošās antivielu metodē fluorescējošās krāsas specifiku galvenokārt vērtē pēc tās unikālās krāsas. Tāpēc, apspriežot smalko specifiku, iepriekš minētie BV ierosmes metodes trūkumi bieži vien atstāj lielu ietekmi.
