Bioloģisko paraugu sagatavošana un novērošana elektronu mikroskopijai
Mikroskopa izšķirtspēja ir atkarīga no izmantotās gaismas viļņa garuma. Elektronu mikroskops, kas sāka parādīties 1933. gadā, kā gaismas avotu izmanto elektronu staru kūli, kura viļņa garums ir daudz īsāks par redzamās gaismas viļņa garumu, tāpēc izšķirtspēja, ko tas var sasniegt, ir ievērojami uzlabota salīdzinājumā ar optiskā mikroskopa izšķirtspēju. Gaismas avotu atšķirība nosaka arī virkni atšķirību starp elektronu mikroskopiem un optiskajiem mikroskopiem.
Atbilstoši elektronu staru attēlveidošanas principu atšķirībām un dažādajiem iedarbošanās veidiem uz paraugiem mūsdienu elektronu mikroskopi ir attīstījušies daudzos veidos. Pašlaik visbiežāk izmantotie ir transmisijas elektronu mikroskopi un skenējošie elektronu mikroskopi. Pirmās vērtības kopējais palielinājums var būt no 1000-1000000. Kopējais palielinājums var atšķirties no 20 līdz 300,000 reizēm. Šis eksperiments galvenokārt iepazīstina ar divu veidu mikroskopa paraugu, transmisijas elektronu mikroskopa un skenējošā elektronu mikroskopa sagatavošanu.
2. Aprīkojums
1. Baktērijas Escherichia coli (Escherichia coli) slīpi.
2. Šķīdums vai reaģents amilacetāts, koncentrēta sērskābe, absolūtais etanols, sterils ūdens, 2% nātrija fosfotvolframāts (pH 6.5-8.0) ūdens šķīdums, 0,3% polietilēns formaldehīda (šķīst hloroformā) šķīdums, šūnas Pigments c, amonija acetāts, plazmīda pBR322.
3. Instrumenti vai citi piederumi: parasts optiskais mikroskops, vara siets, porcelāna piltuve, vārglāze, trauks, sterils pilinātājs, sterilas pincetes, tapas, priekšmetstikliņi, skaitīšanas dēlis, vakuuma pārklāšanas mašīna, kritisko punktu žāvētājs utt.
3. Darbības soļi
(1) Paraugu sagatavošana un novērošana transmisijas elektronu mikroskopijai
1. Metāla sieta apstrāde
Paraugu optiskajai mikroskopijai novieto uz stikla priekšmetstikliņa novērošanai. Tomēr transmisijas elektronu mikroskopijā, tā kā elektroni nevar iekļūt stikla loksnē, sieta materiālus var izmantot tikai kā nesējus, ko parasti sauc par nesējtīkliem. Nesējsietu var iedalīt daudzās dažādās specifikācijās dažādu materiālu un formu dēļ, starp kuriem visbiežāk tiek izmantots 200-400 siets (caurumu skaits) vara siets. Vara siets pirms lietošanas jāapstrādā, lai noņemtu netīrumus un saglabātu to tīru, pretējā gadījumā tas ietekmēs atbalsta plēves kvalitāti un paraugu fotoattēlu skaidrību. Šajā eksperimentā izmanto 400-tīkla vara sietu, ko var apstrādāt šādi: vispirms vairākas stundas iemērc un balina ar amilacetātu, pēc tam vairākas reizes noskalo ar destilētu ūdeni un pēc tam iemērc absolūtā etanolā. dehidratācija. Ja pēc iepriekšminētajām metodēm vara sieta joprojām nav tīra, varat to uz 1 līdz 2 minūtēm mērcēt atšķaidītā koncentrētā sērskābē (1:1) vai dažas minūtes vārīt 1% NaOH šķīdumā, noskalot ar destilētu. vairākas reizes ūdeni un pēc tam ievietojiet to bezūdens Dehidrējiet etanolā un nolieciet malā.
2. Atbalsta membrānas sagatavošana
Novērojot paraugus, nesējtīkls jāpārklāj arī ar nestrukturētas, viendabīgas plēves kārtu, pretējā gadījumā no nesēja tīkla atverēm iztecēs nelieli paraugi. Šo plēvi parasti sauc par atbalsta plēvi vai nesējplēvi. Atbalsta plēvei jābūt elektronu caurspīdīgai, un tās biezumam parasti jābūt mazākam par 20 nm; elektronu staru ietekmē plēvei vajadzētu būt arī noteiktai mehāniskajai izturībai, lai saglabātu struktūras stabilitāti un labu siltumvadītspēju; turklāt elektronu mikroskopijā jāizmanto atbalsta tīkls. Zem tā nedrīkst būt redzama struktūra, nekāda ķīmiska reakcija ar pārnēsājamo paraugu un nekādi traucējumi parauga novērošanā. Tās biezums parasti ir aptuveni 15 nm. Atbalsta plēve var būt plastmasas plēve (piemēram, kolodija plēve, polietilēna formaldehīda plēve utt.), oglekļa plēve vai metāla plēve (piemēram, berilija plēve utt.). Normālos darba apstākļos plastmasas plēve var atbilst prasībām. Starp plastmasas plēvēm kolodija plēvi ir salīdzinoši viegli pagatavot, taču tās izturība nav tik laba kā polietilēna formaldehīda plēve.
