Wprowadzenie do zalet i wad wielofotonowej Mikroskopii Skaningowej Laserowej
Multiphoton lāzera skenēšanas mikroskopa priekšrocības:
1. Sarkanā vai infrasarkanā gaisma, gaismas izkliede ir maza, un mazu daļiņu izkliede ir apgriezti proporcionāla viļņa garuma ceturtajam spēkam.
2. Vairāk izkliedētu fotonu no attēlveidošanas šķērsgriezuma var savākt bez nepieciešamības pēc pinholēm.
3. Pinholes nevar atšķirt izkliedētus fotonus, kas izstaroti no defocētiem vai fokusa laukumiem, un daudzfotoniem ir labāka signāla un trokšņa attiecība dziļā attēlveidošanā.
4. Ultravioletā vai redzamā gaisma, ko izmanto atsevišķu fotonu ierosmei, paraugs viegli absorbē un novājina, pirms stars sasniedz fokusa plakni, padarot to grūti satraukt dziļu slāņu.
5. Runājot par bioloģiskās mikroskopijas novērošanu, pirmais apsvērums ir nesabojāt paša organisma aktīvo stāvokli, uzturēt ūdens, jonu koncentrācijas, skābekļa un barības vielu cirkulāciju. Gaismas novērošanas jomā gan termiskajai, gan fotonu enerģijai jāpaliek apstarošanas devā un gaismas enerģijā, kas nesabojā šūnas.
6. Multiphoton mikroskopijai ir daudz priekšrocību. Trīsdimensiju izšķirtspējas, dziļuma iebrukuma, izkliedes efektivitātes, fona gaismas, signāla un trokšņa attiecība, kontrole utt
Multiphoton lāzera skenēšanas mikroskopa trūkumi:
1. Tikai fluorescences attēlveidošanai.
2. Ja paraugā ietilpst hromofori, kas var absorbēt ierosmes gaismu, paraugu var pakļaut termiskiem bojājumiem.
3. Izšķirtspēja ir nedaudz samazināta, lai gan to var uzlabot, vienlaikus izmantojot mazus konfokālos caurumus, ir signāla zudums.
4. Sakarā ar dārgu īpaši ātru lāzeru ierobežojumiem daudzfotonu skenēšanas mikroskopu izmaksas ir salīdzinoši augstas.
