Fluorescences kopējās iekšējās refleksijas fluorescences mikroskopijas pielietojums
TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscope), kopējās iekšējās atstarošanas fluorescences mikroskops, gaismai nokļūstot vidē ar zemāku laušanas koeficientu no vides ar augstu refrakcijas koeficientu, ja krītošais leņķis ir pietiekami liels, visa gaisma tiek atstarota bez refrakcijas, bet Abu mediju saskarne rada izgaistošus viļņus, kas var ierosināt fluorescenci 100 nm robežās saskarnes tuvumā, lai realizētu objekta virsmas novērošanu. Uzbudinājuma gaismu var nosūtīt caur parastā fluorescences mikroskopa apgaismotāju vai īpašu apgaismotāju, un var kontrolēt lāzera krišanas leņķi. Lai novērstu ierosmes gaismas iekļūšanu detektorā, tiek izmantota momentānā lauka ierosmes metode. Uzbudinājuma gaisma stikla un ūdens saskarnē rada pilnu iekšējo atstarošanu. Ierosinājuma gaismas eksponenciālas vājināšanās dēļ tikai parauga laukums, kas ir ļoti tuvu kopējai atstarošanas virsmai, radīs fluorescences atstarošanos, kas ievērojami samazina fona gaismas trokšņa traucējumus novērošanas mērķim, tāpēc šī tehnoloģija tiek plaši izmantota dinamiskajā novērošanā. šūnu virsmas vielas.
Kopējās iekšējās atstarošanas fluorescences mikroskopijas (TIRFM) shematiskā diagramma
①Paraugs ②Izplūstošo viļņu diapazons ③ Pārseguma stikls ④Eļļas iegremdēšana ⑤Mērķis ⑥Emisijas stars (signāls) ⑦ Ierosmes stars
Lai panāktu pilnīgu iekšējo atstarošanos, ir nepieciešams liels krišanas leņķis, piemēram, krītošais leņķis stikla un ūdens saskarnē ir lielāks par 61 grādu. To var panākt, izmantojot prizmu, ko sauc par prizmu balstītu TIRFM, vai objektīvu ar lielu skaitlisko apertūru, ko sauc par objektīva tipa TIRFM. Pašreizējie komercializētie kopējās iekšējās atstarošanas fluorescences mikroskopi parasti ir objektīva tipa, ar lielu ātrumu un augstu precizitāti.
Kopējās iekšējās atstarošanas fluorescences mikroskopija tiek plaši izmantota dažos bioloģiskajos laukos, jo tā var realizēt fluorescences novērošanu ļoti plānā diapazonā (mazāk nekā 100 nm) uz objektu virsmas. Piemēram, šādas lietojumprogrammas:
Šūnu virsmas attēlu novērošana: šūnu membrānas virsmas struktūra, šūnu virsmas kontakts, membrānas virsmas dinamika/olbaltumvielu lokalizācija.
Vienas molekulas novērošana un manipulācijas: miozīns, aktīns un Cy3-marķētais ATP.
Šūnu membrānas virsmas kustība: piemēram, pūslīšu iesūkšanās, vezikulu izelpošana un vezikulu eksokrīna. uz
Kalcija dzirksteļošanas fenomena novērošana šūnu membrānā, jonu kanālu monitorings.
Molekulārā motora pētījumi: rotācijas motori, citoskeleta proteīni, polimēri, G proteīni, gredzena proteīni, nukleotīdu motori.
Papildus bioloģijas jomai tam ir arī labs pielietojums ķīmijas jomā ķīmisko molekulāro struktūru novērošanai.
