Lāzerskenēšanas daudzfotonu mikroskopijas priekšrocību uzlabošana
Daudzfotonu lāzera skenēšanas mikroskopija ir būtisks uzlabojums salīdzinājumā ar optisko mikroskopiju. Tas var novērot dzīvo šūnu, fiksēto šūnu un audu dziļo struktūru un iegūt skaidras un asas daudzslāņu Z plaknes struktūras, tas ir, optiskās sekcijas, no kurām var izveidot parauga trīsdimensiju cieto struktūru. Konfokālā mikroskopija izmanto lāzera gaismas avotu, kas pēc izplešanās aizpilda visu objektīva objektīva aizmugurējo fokusa plakni un pēc tam iet cauri objektīva lēcu sistēmai, lai saplūstu ļoti mazā parauga fokusa plaknes punktā. Atkarībā no objektīva skaitliskās apertūras spilgtākā apgaismojuma punkta diametrs ir aptuveni 0,25 ~ 0,8 μm un dziļums ir aptuveni 0,5 ~ 1,5 μm . Konfokālās vietas lielums ir atkarīgs no mikroskopa konstrukcijas, lāzera viļņa garuma, objektīva lēcas īpašībām, skenēšanas vienības statusa iestatījumiem un parauga īpašībām. Lauka mikroskopijai ir liels apgaismojuma diapazons un dziļums, savukārt konfokālajai mikroskopijai ir fokusēts apgaismojums, kas fokusēts uz fokusa punktu fokusa plaknē. Konfokālās mikroskopijas galvenā priekšrocība ir tā, ka tā var precīzi optiski sadalīt biezus fluorescējošos paraugus (kas var sasniegt 50 μm vai vairāk), un sekciju biezums ir aptuveni 0,5–1,5 μm. Optisko griezumu attēlu sēriju var iegūt, pārvietojot paraugu uz augšu un uz leju, izmantojot mikroskopa Z-ass pakāpju motoru. Attēla informācijas iegūšana tiek kontrolēta plaknē, un to netraucēs signāli, ko izstaro no citām parauga vietām. Pēc fona fluorescences ietekmes noņemšanas un signāla-trokšņa attiecības palielināšanas konfokālo attēlu kontrasts un izšķirtspēja ir ievērojami uzlaboti salīdzinājumā ar tradicionālajiem lauka apgaismojuma fluorescences attēliem. Daudzos paraugos daudzi sarežģīti strukturālie komponenti ir savstarpēji saistīti, veidojot sarežģītas sistēmas, taču, tiklīdz var savākt pietiekami daudz optisko sekciju, mēs varam tās rekonstruēt trīs dimensijās, izmantojot programmatūru. Šī eksperimentālā metode ir plaši izmantota bioloģiskajos pētījumos, lai noskaidrotu sarežģītās strukturālās un funkcionālās attiecības starp šūnām vai audiem.
