Paplašinot daudzfotonu lāzera skenēšanas mikroskopijas priekšrocības, iekļaujot
Lāzera skenēšanas multiphotonu mikroskops ir būtisks optiskās mikroskopijas uzlabojums, kas galvenokārt izpaužas spējā novērot dzīvu šūnu, fiksētu šūnu un audu dziļas struktūras un iegūt skaidras un asas daudzslāņu Z-plakņu struktūras, proti, optiskās šķēles, kuras var izmantot, lai izveidotu trīsdimensiju cietvielu struktūras. Konfokālais mikroskops izmanto lāzera gaismas avotu, kas tiek paplašināts, lai aizpildītu visu objektīva fokusa plakni, un pēc tam saplūda ļoti mazos punktos parauga fokusa plaknē caur objektīva objektīva sistēmu. Saskaņā ar objektīva skaitlisko atveri, spilgtā apgaismojuma punkta diametrs ir aptuveni 0. 25-0. 8 μm, un dziļums ir aptuveni 0. 5-1}. 5 μm. Konfokālā punkta lielumu nosaka ar mikroskopa dizainu, lāzera viļņa garumu, objektīviem īpašībām, skenēšanas vienības stāvokļa iestatījumiem un parauga īpašībām. Lauka mikroskopa apgaismojuma diapazons un dziļums ir liels, savukārt konfokālā mikroskopa apgaismojums ir vērsts uz fokusa plaknes fokusa punktu. Konfokālās mikroskopijas pamata priekšrocība ir tā, ka tā var veikt smalku optisko sadalījumu uz bieziem fluorescējošiem paraugiem (līdz 5 0 μm vai vairāk) ar biezumu aptuveni 0,5 līdz 1,5 μm. Optisko šķēles attēlu sēriju var iegūt, pārvietojot paraugu uz augšu un uz leju, izmantojot mikroskopa Z-ass pakāpju motoru. Attēla informācijas kolekcija tiek kontrolēta * * plaknē, bez traucējumiem no signāliem, kas izstaroti no citām parauga pozīcijām. Pēc fona fluorescences ietekmes noņemšanas un signāla un trokšņa attiecības palielināšanas, konfokālo attēlu kontrasts un izšķirtspēja ir ievērojami uzlabota, salīdzinot ar tradicionālajiem lauka apgaismojuma fluorescences attēliem. Daudzos paraugos sarežģīti strukturālie komponenti savstarpēji savienojas, veidojot sarežģītas sistēmas, bet, ja var savākt pietiekami daudz optisko sekciju, mēs varam izmantot programmatūru, lai tos rekonstruētu trīs dimensijās. Šī eksperimentālā metode ir plaši izmantota bioloģiskajos pētījumos, lai noskaidrotu sarežģītās strukturālās un funkcionālās attiecības starp šūnām vai audiem.
