Fluorescences mikroskopa un parastā optiskā mikroskopa atšķirības un īpašības
Fluorescences mikroskops un parasts optiskais mikroskops atšķiras, parauga novērošanai nav nepieciešams parasta gaismas avota apgaismojums, bet gan noteikta gaismas viļņa garuma izmantošana (parasti ultravioletā, zili violetā gaisma) ierosina fluorescējošu materiālu paraugā. zem mikroskopa, lai fluorescences mikroskopa gaismas avota fluorescence nespēlētu tiešu apgaismojumu, bet gan kā sava veida fluorescējoša materiāla ierosmi enerģijas avota paraugā. Iemesls, kāpēc mēs varam novērot paraugu, nav saistīts ar gaismas avota apgaismojumu, bet gan fluorescences fenomenu, ko rada fluorescējošais materiāls paraugā pēc ierosmes gaismas enerģijas absorbēšanas. Var redzēt, ka fluorescences mikroskopa īpašības, galvenokārt tā gaismas avots, var nodrošināt lielu skaitu specifisku ierosmes gaismas viļņu garuma diapazonu, lai fluorescējošais materiāls pārbaudītajā paraugā varētu iegūt nepieciešamo ierosmes gaismas intensitāti. Tajā pašā laikā fluorescences mikroskopam jābūt atbilstošai filtru sistēmai. Fluorescences mikroskops ir fluorescences histoķīmijas pamatrīks. Tas sastāv no īpaši augsta spiediena gaismas avota, filtru sistēmas (tostarp ierosmes un slāpēšanas filtra plāksnes), optiskās sistēmas un fotografēšanas sistēmas un citiem galvenajiem komponentiem, ir noteikta gaismas viļņa garuma izmantošana, lai stimulētu paraugu izstarot fluorescenci.
1. Fluorescences ierosmes veids: atkarībā no viļņa garuma diapazona gaisma ir sadalīta UV ierosināšanas metodē (izmantojot ultravioleto apgaismojumu) un BV ierosmes metodē (izmantojot zilo violeto gaismu) divu veidu UV ierosmes metode ir īsāka par 400 nm ultravioletās gaismas tuvumā. uzbudinājums. Šajā metodē nav redzamas ierosmes gaismas, tāpēc novērotā fluorescence parāda krāsvielai raksturīgo fluorescenci, un ir viegli atšķirt specifisko fluorescenci paraugā no fona audu pašfluorescences.
2. BV ierosmes metode: Metode ir centrēta uz 404 nm, 434 nm no ultravioletās uz zilo gaismu ierosināšanai. Šajā metodē parauga apstarošanai tiek izmantota zilā gaisma, tāpēc fluorescences novērošanas sistēmas nogriešanas filtram ir jāizmanto filtrs, kas var pilnībā bloķēt zilo gaismu un var adekvāti izturēt vēlamo zaļo un dzelteno fluorescenci. Fluorescējošie pigmenti fluorescējošu antivielu metodei. Tā kā ierosmes gaismas maksimālās absorbcijas viļņa garums un fluorescences maksimālās emisijas viļņa garums ir tuvu viens otram, BV ierosmes metodē izmantotajiem filtriem jābūt asiem nogriešanas filtriem. Šī metode izmanto zilo gaismu kā ierosmes gaismu, tāpēc fluorohroma absorbcijas efektivitāte ir augstāka un var iegūt gaišāku attēlu. Trūkums ir tāds, ka fluorescenci zem 500 nm nevar redzēt, un virs 500 nm viss attēls izskatās dzeltens. Fluorescējošo antivielu metodē lielāko daļu specifiskuma nosaka pēc fluorohroma unikālās krāsas, tāpēc iepriekš aprakstītās BV ierosmes metodes trūkumi mēdz būt ārkārtīgi ietekmīgi, apspriežot smalko specifiku.
