Fluorescences mikroskopa izmantošanas metodes un piesardzības pasākumi
Lietošanas metode:
(1) Novietojiet materiāla loksni uz nesēja skatuves.
(2) Ieslēdziet fluorescences mikroskopa sprieguma regulatoru. Pēc tam nospiediet starta grupu, lai aizdedzinātu UV lampu nedrīkst izslēgt 15 minūtes un to nedrīkst restartēt 3 minūtes pēc izslēgšanas.
(3) Pagrieziet ierosmes filtru uz v, dihromisko plēvi uz v, izvēlieties 495 vai 475 nm bloķējošo filtru.
(4) Izvēlieties uvFL40, uvFL100 fluorescenci uztverošu objektīva mikroskopiju.
(5) Uz priekšmetstikliņa pievienojiet nefluorescējošu eļļu, vispirms 40x un pēc tam 100x fokusēšanas mikroskopija. Rādīt fluorescenci.
(7) Tā kā fluorescējošais materiāls ar ultravioleto starojumu, palielinoties fluorescencei, laika gaitā pakāpeniski vājinājās, tāpēc mikroskopiskā izmeklēšana ir bieži jāmaina redzes lauks.
(8) var izmantot arī uvFL10 vai uvFL20 maza palielinājuma mikroskopijas materiālu (ar zemu palielinājumu, nepievienojot nefluorescējošu eļļu).
Fluorescences attēla ierakstīšanas metode:
Fluorescences attēls, kas redzams ar fluorescences mikroskopu, viens ir ar morfoloģiskām īpašībām, otrs ir ar fluorescences krāsu un spilgtumu, vērtējot rezultātus, abi ir jāapvieno ar visaptverošu vērtējumu. Rezultāti tiek fiksēti pēc subjektīviem rādītājiem, ti, darbinieka vizuāli novērojot. Kā vispārējs kvalitatīvs novērojums, pamatā uzticams. Attīstoties tehnoloģijām un zinātnei, dažādās pakāpēs tiek izmantoti objektīvi rādītāji, lai reģistrētu sprieduma rezultātus, piemēram, šūnu spektrofotometra, attēla analizatora un citu instrumentu izmantošana. Tomēr ar šiem instrumentiem reģistrētie rezultāti ir jāapvieno arī ar subjektīvu vērtējumu.
Fluorescences mikroskopa fotografēšanas tehnoloģija ir ļoti nepieciešama fluorescences attēlu ierakstīšanai, jo fluorescence ir viegli izbalināta un vājināta, lai uzreiz fiksētu fotografēšanas rezultātus. Metode būtībā ir tāda pati kā parastajā mikrogrāfijā. Vienkārši jāizmanto ātrgaitas fotofilma, piemēram, ASA200 virs vai 24. augstāka. Tā kā ultravioletā gaisma uz fluorescences pārsprāgšanas efektu, piemēram, FITC marķieri, ultravioletās gaismas apstarošanas laikā 30 s, fluorescences spilgtums tiek samazināts par 50%. Tāpēc ekspozīcijas ātrums ir pārāk lēns, lai uzņemtu fluorescences attēlu. Vispārējās pētniecības fluorescences mikroskopiem ir pusautomātiskas vai pilnībā automātiskas mikrofotografēšanas sistēmas ierīces.
Piesardzības pasākumi:
(1) Strādājiet stingri saskaņā ar fluorescences mikroskopa rūpnīcas rokasgrāmatas prasībām, nemainiet procedūru patvaļīgi.
(2) Pārbaude jāveic tumšajā telpā. Pēc ieiešanas tumšajā telpā pievienojiet strāvas padevi, iededziet īpaši augstspiediena dzīvsudraba lampu uz 5-15min, pagaidiet, līdz gaismas avots izstaro spēcīgu gaismu, lai stabilizētu, un acis pilnībā pielāgojas tumšajai telpai, un tad sāciet novērot paraugu.
(3) Lai novērstu acu bojājumus no ultravioletās gaismas, regulējot gaismas avotu, jāvalkā aizsargbrilles.
(4) pārbaudīt laiku katru reizi, lai 1 ~ 2h ir piemērots, vairāk nekā 90min, ultra-augstspiediena dzīvsudraba lampas gaismas intensitāte pakāpeniski samazinājās, fluorescence vājināta; paraugi, kas apstaroti ar ultravioleto gaismu 3 ~ 5min, arī fluorescence ir ievērojami vājināta; tāpēc * nedrīkst būt vairāk par 2 ~ 3h.
(5) Fluorescences mikroskopa gaismas avota kalpošanas laiks ir ierobežots, paraugam jāveic centralizēta pārbaude, lai ietaupītu laiku un aizsargātu gaismas avotu. Kad tā ir karsta, jāpievieno ventilatora dzesēšana, jauna spuldze jāreģistrē no laika lietošanas sākuma. Kad spuldze ir nodzisusi un to vēlas atkal izmantot, pirms iedegšanas spuldzei jābūt pietiekami atdzesētai. Vairākas reizes jāizvairās no gaismas avota.
(6) Novērojiet paraugu tūlīt pēc krāsošanas, jo fluorescence laika gaitā pakāpeniski samazināsies. Ja paraugu ievieto polietilēna plastmasas maisiņā, kas tiek uzglabāts 4 grādu temperatūrā, tas var aizkavēt fluorescences vājināšanās laiku un novērst blīvējošā līdzekļa iztvaikošanu.
(7) Fluorescences spilgtuma vērtēšanas kritēriji: parasti iedalīti četros līmeņos, tas ir, “viens” — nav vai ir redzama vāja fluorescence. "+" - tikai skaidri redzama fluorescence. “+ +” — redzams ar spilgtu
