Kā mikroskopā tiek novērota mikrobu šūnu morfoloģija?
Mikroskopi tika izgudroti, lai redzētu smaidošus objektus, kurus nevar redzēt ar neapbruņotu aci. Mikroorganismi ir ļoti mazi, tāpēc tie ir jāpalielina un jānovēro ar mikroskopa palīdzību. Turklāt ir daudz veidu mikroorganismu, tāpēc būtībā lielākā daļa optisko mikroskopu var novērot mikroorganismus. Nākamais jautājums ir par to, kāda veida mikroskopu vajadzētu izmantot, lai novērotu un analizētu kādus mikroorganismus. Parastie mikroskopi, kurus var izmantot, lai novērotu mikrobu morfoloģiju, ir bioloģiskie mikroskopi, fāzes kontrasta mikroskopi, apgrieztie mikroskopi, fluorescences mikroskopi, konfokālie mikroskopi utt.
Tālāk ir aprakstīti dažādi mikroskopi, ko izmanto mikroorganismu novērošanai:
1. Parastais optiskais mikroskops kā gaismas avotu izmanto dabisko gaismu vai gaismu, un tā viļņa garums ir aptuveni 0,4 μm. Mikroskopa izšķirtspēja ir puse no viļņa garuma, tas ir, 0,2 μm, un mazākais ar neapbruņotu aci redzamais attēls ir 0,2 mm. Tāpēc, izmantojot eļļas (imersijas) spoguli, lai palielinātu 1000 reizes, 0,2 μm daļiņas var palielināt ar neapbruņotu aci par 0,2 mm. Parastos optiskos mikroskopus var izmantot baktēriju, aktinomicītu un sēnīšu novērošanai.
2. Darkfield mikroskopiju parasti izmanto, lai novērotu nekrāsotu mikrobu morfoloģiju un kustību. Pēc tam, kad parastajā mikroskopā ir uzstādīts tumšā lauka kondensators, gaisma nevar iekļūt tieši no vidus, un redzes lauks ir tumšs. Kad paraugs saņem slīpu gaismu no kondensatora malas, tas var tikt izkliedēts, tāpēc tumšā lauka fonā var novērot spilgtus mikroorganismus, piemēram, baktērijas vai spirohetas.
3. Fāzes kontrasta mikroskops Fāzes kontrasta mikroskops izmanto fāzu starpības plāksnes gaismas efektu, lai mainītu tiešās gaismas gaismas fāzi un amplitūdu, kā arī pārvērstu gaismas fāzes atšķirību gaismas intensitātes starpībā. Fāzu kontrasta mikroskopā, gaismai izejot cauri nekrāsotam paraugam, gaismas fāzes atšķirību izraisa dažādu parauga daļu blīvuma neatbilstība, un var novērot mikroorganismu morfoloģiju, iekšējo struktūru un kustības režīmu.
4. Fluorescences mikroskops Fluorescences mikroskops būtībā ir tāds pats kā parastais optiskais mikroskops, galvenā atšķirība ir gaismas avots, filtrs un kondensators. Pašlaik lielākā daļa no tiem izmanto epi-light ierīces, un augstspiediena dzīvsudraba spuldzes parasti izmanto kā gaismas avotus, kas var izstarot ultravioleto vai zili violeto gaismu. Ir divu veidu filtri: ierosmes filtrs un absorbcijas filtrs. Papildus vispārējiem spilgta lauka kondensatoriem fluorescences mikroskopos var izmantot arī tumšā lauka kondensatorus, izmantojot zilu gaismu, lai uzlabotu kontrastu starp fluorescenci un fonu. Šī metode ir piemērojama tādu baktēriju noteikšanai vai identificēšanai, kas iekrāsotas ar fluorescējošiem pigmentiem vai kombinētas ar fluorescējošām antivielām.
5. Elektronu mikroskopi izmanto elektronu plūsmu kā gaismas avotu, un viļņa garums desmitiem tūkstošu reižu atšķiras no redzamās gaismas, kas ievērojami uzlabo izšķirtspēju. Tas izmanto arī magnētisko spoli kā optisko pastiprināšanas sistēmu, un palielinājums var sasniegt desmitiem tūkstošu vai simtiem tūkstošu reižu. To bieži izmanto vīrusu daļiņu un baktēriju ultrastruktūras novērošanai.
Nekrāsotu mikrobu paraugu novērošana:
Nekrāsotus paraugus parasti var izmantot, lai novērotu baktēriju morfoloģiju, spēku un kustību. Baktērijas ir bezkrāsainas un caurspīdīgas, ja tās nav iekrāsotas, un tās mikroskopā novēro galvenokārt pēc atšķirības starp baktēriju refrakcijas indeksu un apkārtējo vidi. Baktērijas ar flagellas enerģiski pārvietojas, savukārt baktērijas bez flagellas uzrāda neregulāru Brauna kustību. Dzīvotspējīgām baktērijām, piemēram, Treponema pallidum, Leptospira un Campylobacter, ir atšķirīgas formas un kustību modeļi, kam ir diagnostiska nozīme. Parasti izmantotās metodes ir spiediena krituma metode, piekaramā kritiena metode un kapilārā metode.
1. Uzklājiet vazelīnu ap tīra ieliektā stikla ieliekto caurumu, izmantojot pakarināšanas metodi, izmantojiet inokulācijas cilpu, lai paņemtu baktēriju suspensijas gredzenu un novietotu to vāka stikla centrā, pēc tam izlīdziniet ieliektā stikla ieliekto caurumu ar pilienu vāka stikla centrā un nosedziet to, pēc tam ātri apgrieziet, viegli piespiediet vāka stiklu, lai tas cieši pieliptu pie vazelīna ieliektā cauruma malā, un novērojiet zem liela palielinājuma mikroskopa (vai tumšs lauks).
2. Paņemiet baktēriju suspensijas gredzenu ar inokulācijas cilpu un novietojiet to tīra stikla priekšmetstikliņa centrā, izmantojot spiediena krituma metodi, un uzmanīgi pārklājiet baktēriju suspensiju ar vāku, uzmanoties, lai izvairītos no burbuļu veidošanās un baktēriju suspensijas pārplūdes. . Pēc dažu sekunžu stāvēšanas novērojiet zem lieljaudas mikroskopa gaišā laukā (vai tumšā laukā).
3. Kapilāro metodi galvenokārt izmanto anaerobo baktēriju kinētikas izmeklēšanai. Parasti izvēlieties 60~70mm garumu. Pēc anaerobo baktēriju suspensijas izsūknēšanas caur kapilāru ar atvērumu 0.5-1,0 mm, noslēdziet abus kapilāra galus ar liesmu. Kapilārs tika fiksēts uz stikla priekšmetstikliņa ar plastmasas papīru un tika novērots zem lieljaudas objektīva tumšā laukā.
Krāsotu mikrobu paraugu novērošana ar mikroskopu:
Pēc tam, kad baktēriju paraugs ir iekrāsots, baktēriju un apkārtējās vides asā krāsas kontrasta dēļ baktēriju morfoloģiskās īpašības (piemēram, izmērs, forma, izvietojums utt.) un dažas īpašas struktūras (piemēram, kā kapsulas, flagellas, sporas utt.) var skaidri novērot parastā optiskā mikroskopā, un baktērijas var klasificēt un identificēt atbilstoši krāsošanas reaktivitātei.
(1) Baktēriju krāsošanas vispārīgā procedūra Vispārējā baktēriju krāsošanas procedūra ir: uztriepe (žāvēšana)-fiksācija-krāsošana.
1. Uztriepes Asins, sekrēciju, ekskrēciju, punkcijas šķidruma un šķidrās kultūras sagatavošana un tiešās plānās plēves uztriepes uz stikla priekšmetstikliņiem; autopsiju vai inficētu dzīvnieku audus, paraugu ņemšanai nosmērē bojājumu ar vates tamponu. Lai sagatavotu baktēriju kolonijas vai zālienu uz cietas barotnes, vispirms izmantojiet inokulācijas cilpu, lai paņemtu parastā fizioloģiskā šķīduma gredzenu un ievietotu to stikla priekšmetstikliņa centrā, pēc tam izmantojiet sterilu inokulācijas cilpu, lai paņemtu nelielu kultūras daudzumu un samaltu. to vienmērīgi parastajā fizioloģiskā šķīdumā, izklājiet to 1 cm2 pārklātā virsmā un ļaujiet tai dabiski nožūt istabas temperatūrā vai lēnām nožūt no attāluma.
2. Fiksācijas mērķis ir iznīcināt baktērijas, koagulēt baktēriju proteīnu un struktūru, kā arī atvieglot iekrāsošanos; veicināt baktēriju pieķeršanos priekšmetstikliņiem, lai mazgāšanas laikā tās neaizskalotu ar ūdeni; mainīt baktēriju caurlaidību pret krāsvielām, kas labvēlīgi ietekmē baktēriju intracelulāro struktūru iekrāsošanu. To parasti nostiprina, karsējot ar liesmu, un izžuvušo uztriepi ātri izlaiž cauri liesmai 3 reizes. Rokas aizmugures ādu labāk nededzināt, kad tā pieskaras slidkalniņam.
3. Krāsošana Atkarībā no dažādiem pārbaudes mērķiem izvēlieties dažādas krāsošanas metodes. Krāsojot, pa pilienam pievienojiet krāsas šķīdumu, lai palielinātu pārklājumu.
4. Kods Jebkuru vielu, kas var pastiprināt afinitāti starp krāsu un krāsoto objektu, nofiksēt krāsu uz krāsotā objekta un izraisīt šūnas membrānas caurlaidības izmaiņas, sauc par kodinātāju. Parasti izmanto alaunu, tanīnskābi, metālu sāļus un jodu utt., Krāsošanas veicināšanai tiek izmantota arī karsēšana. Kodinātājus var izmantot starp primāro krāsošanu un pretkrāsošanu, kā arī tos var lietot pēc fiksācijas vai ietvert fiksatorā un krāsošanā.
5. Atkrāsošana Jebkuru ķīmisku līdzekli, kas var noņemt krāsotā objekta krāsu, sauc par atkrāsotāju. Kā atkrāsotājus parasti izmanto etanolu, acetonu utt. Krāsošanas līdzeklis var noteikt baktēriju un krāsvielu kombinācijas stabilitātes pakāpi, ko var izmantot diferenciālai krāsošanai.
6. Pretkrāsošana Baktērijas vai to struktūras, kas ir atkrāsotas, bieži tiek iekrāsotas ar pretkrāsošanas šķīdumu, lai to būtu viegli novērot. Pretkrāsošanas šķīduma krāsa atšķiras no primārā krāsošanas šķīduma krāsas, lai veidotu asu kontrastu. Pretkrāsojums nedrīkst būt pārāk spēcīgs, lai neaizsegtu sākotnējā krāsojuma krāsu.
