Uzlabotas lāzerskenējošā daudzfotonu mikroskopa priekšrocības
Lāzerskenējošs daudzfotonu mikroskops ir nozīmīgs optiskā mikroskopa uzlabojums, kas galvenokārt parāda, ka ar to var novērot dzīvo šūnu, fiksēto šūnu un audu dziļo struktūru un iegūt skaidru un asu daudzslāņu Z plaknes struktūru, tas ir, optiskās šķēles. , ko var izmantot, lai izveidotu paraugu trīsdimensiju cieto struktūru. Konfokālais mikroskops izmanto lāzera gaismas avotu, kas pēc izplešanās aizpilda visu objektīva objektīva aizmugurējo fokusa plakni un pēc tam iziet cauri objektīva lēcu sistēmai, lai saplūstu ļoti mazos punktos parauga fokusa plaknē. Saskaņā ar objektīva skaitlisko apertūru spilgtākā apgaismojuma punkta diametrs ir aptuveni 0,25 ~ 0,8 μm un dziļums ir aptuveni 0,5 ~ 1,5 μm .. Kopolimerizācijas fokusa lielums ir atkarīgs no mikroskopa konstrukcijas, lāzera viļņa garuma, objektīva raksturlielumiem, skenēšanas vienības stāvokļa iestatījuma un parauga īpašībām. Apgaismojuma diapazons un lauka dziļuma mikroskops ir ļoti liels, savukārt konfokālā mikroskopa apgaismojums ir koncentrēts uz * * fokusa plakni. Konfokālā mikroskopa galvenā priekšrocība ir tā, ka ar to var izveidot smalkas optiskas šķēles no bieziem fluorescējošiem paraugiem (kas var sasniegt 50 μm vai vairāk), un šķēlumu biezums ir aptuveni 0,5–1,5 μm. Optisko šķēlumu attēlu sēriju var iegūt, pārvietojot paraugu uz augšu un uz leju ar mikroskopa Z-ass soļu motoru. Attēla informācijas iegūšana tiek kontrolēta pirmajā plaknē, un to netraucēs signāli no citām parauga pozīcijām. Pēc fona fluorescences ietekmes noņemšanas un signāla un trokšņa attiecības palielināšanas konfokālā attēla kontrasts un izšķirtspēja acīmredzami uzlabojas salīdzinājumā ar tradicionālo lauka apgaismojuma fluorescences attēlu. Daudzos paraugos daudzi sarežģīti strukturālie komponenti ir savstarpēji saistīti, veidojot sarežģītu sistēmu, taču, tiklīdz var savākt pietiekami daudz optisko sekciju, mēs varam tās rekonstruēt trīs dimensijās, izmantojot programmatūru. Šī eksperimentālā metode ir plaši izmantota bioloģiskajos pētījumos, lai noskaidrotu sarežģītās strukturālās un funkcionālās attiecības starp šūnām vai audiem.
