Ievads par izvēli starp apgrieztajiem mikroskopiem un fluorescences mikroskopiem
Mikroskops ir svarīgs instruments šūnu kultūrā un ar to saistītos atvasinājumu eksperimentos. Šobrīd tirgū ir pieejami dažāda veida mikroskopi, un izvēlēties vajadzībām atbilstošu un piemērotu mikroskopu ir izaicinājums. Tālāk mēs iepazīstināsim ar apgriezto mikroskopu un fluorescences mikroskopu principiem, lai atvieglotu izvēli.
Apgrieztā mikroskopa sastāvs ir tāds pats kā parastajam mikroskopam, kas galvenokārt sastāv no trim daļām: mehāniskās daļas, apgaismojuma daļas un optiskās daļas. Apgrieztā mikroskopa sastāvs ir tāds pats kā parastajam vertikālajam mikroskopam, izņemot to, ka objektīva lēca un apgaismojuma sistēma ir apgriezti, pirmā zem skatuves un otrā virs skatuves. Šī struktūra ļauj ievērojami palielināt efektīvo attālumu starp apgaismojuma fokusēšanas sistēmu un skatuvi, atvieglojot biezāku novērošanas instrumentu, piemēram, kultivēšanas trauku un šūnu kultūras pudeles, novietošanu (protams, ir pieļaujami arī stikla priekšmetstikliņi), savukārt darba attālumam starp objektīvu un materiālu nav jābūt ļoti lielam. Apgriezto mikroskopu izmanto medicīnas un veselības iestādes, universitātes un pētniecības institūti, lai novērotu mikroorganismus, šūnas, baktērijas, audu kultūru, suspensijas, nogulsnes utt. Ar to var nepārtraukti novērot šūnu un baktēriju reprodukcijas un dalīšanās procesu barotnē, kā arī var uztvert jebkuru stāvokli šī procesa laikā. Plaši izmanto tādās jomās kā citoloģija, parazitoloģija, onkoloģija, imunoloģija, gēnu inženierija, rūpnieciskā mikrobioloģija, botānika utt.
Fluorescences mikroskopiju izmanto, lai pētītu vielu absorbciju, transportēšanu, izplatību un lokalizāciju šūnās. Pārbaudītajam objektam ir divi fluorescences ģenerēšanas veidi: spontāna fluorescence, kas tieši izstaro fluorescenci pēc UV starojuma; Sekundārā fluorescence rodas, ja novēroto objektu apstrādā ar fluorescējošām krāsvielām un pēc tam apstaro ar ultravioleto gaismu, lai izstarotu fluorescenci. Dažas vielas šūnās, piemēram, hlorofils, ultravioletā starojuma ietekmē rada spontānu fluorescenci; Dažas vielas pašas nevar izstarot fluorescenci, bet, ja tās ir iekrāsotas ar fluorescējošām krāsvielām vai fluorescējošām antivielām, tās var izstarot arī sekundāro fluorescenci pēc apstarošanas ar ultravioleto gaismu. Fluorescences mikroskops izmanto ļoti efektīvu punktveida gaismas avotu, lai izstarotu noteiktu gaismas viļņa garumu (ultravioleto gaismu 365 nm vai purpura zilo gaismu 420 nm) caur krāsu filtru sistēmu kā ierosmes gaismu, kas ierosina paraugā esošās fluorescējošās vielas, lai izstarotu dažādas fluorescences krāsas, un pēc tam novēro caur okulāra palielinājumu. Tādā veidā pat ar vāju fluorescenci spēcīgā fonā to ir viegli atpazīt un tam ir augsta jutība. To galvenokārt izmanto šūnu struktūras, funkciju un ķīmiskā sastāva izpētei.
