Bioloģisko paraugu sagatavošana un novērošana elektronu mikroskopiem
Mikroskopa izšķirtspēja ir atkarīga no izmantotās gaismas viļņa garuma. Elektronu mikroskops, kas parādījās 1933. gadā, sasniedza ievērojami augstāku izšķirtspēju nekā optiskais mikroskops, jo kā gaismas avoti tika izmantoti elektronu stari, kuru viļņu garums ir daudz īsāks nekā redzamā gaisma. Dažādie gaismas avoti arī nosaka virkni atšķirību starp elektronu mikroskopiem un optiskajiem mikroskopiem.
Pamatojoties uz atšķirībām elektronu staru attēlveidošanas principos un veidos, kādos tie iedarbojas uz paraugiem, mūsdienu elektronu mikroskopi ir attīstījušies daudzos veidos. Pašlaik visbiežāk izmantotie ir transmisijas elektronu mikroskopi un skenējošie elektronu mikroskopi. Pirmajam ir kopējais palielinājums, kas var mainīties no 1000 līdz 10000000 reižu, savukārt otrajam ir kopējais palielinājums, kas var mainīties no 20 līdz 300 000 reižu. Šis eksperiments galvenokārt iepazīstina ar divu veidu mikroskopa paraugu sagatavošanu, transmisijas elektronu mikroskopiju un skenējošu elektronu mikroskopiju.
2, aprīkojums
1. Escherichia coli celms ir slīps.
2. Šķīdums vai reaģents: pentilacetāts, koncentrēta sērskābe, bezūdens etanols, sterils ūdens, 2% nātrija fosfotvolframāta (pH 6,5-8,0) ūdens šķīdums, 0,3% polivinilformaldehīda (izšķīdināts hloroformā) šķīdums, citohroma acetāts2 BR,3 amonija acetāts2, BR
3. Instrumenti vai citi instrumenti ietver parastos optiskos mikroskopus, vara tīklus, porcelāna piltuves, vārglāzes, Petri trauciņus, sterilus pilinātājus, sterilas pincetes, tapas, stikla priekšmetstikliņus, skaitīšanas plāksnes, vakuuma pārklāšanas mašīnas, kritisko punktu žāvētājus utt.
3, darbības soļi
(1) Paraugu sagatavošana un novērošana pārraides elektronu mikroskopijai
1. Metāla sieta apstrāde
Optiskā mikroskopa paraugu novērošanai novieto uz priekšmetstikliņa. Tomēr pārraides spogulī, tā kā elektroni nevar iekļūt stikla loksnē, sieta materiālu var izmantot tikai kā nesēju, ko parasti dēvē par nesējsietu. Nesējsietu var iedalīt dažādās specifikācijās dažādu materiālu un formu dēļ, starp kuriem parasti izmanto vara sietu ar 200-400 acīm (caurumu skaits). Vara siets pirms lietošanas jāapstrādā, lai noņemtu visus netīrumus un saglabātu to tīru, pretējā gadījumā tas ietekmēs atbalsta plēves kvalitāti un paraugu fotoattēlu skaidrību. Šajā eksperimentā izmantoto 400 acu vara sietu var apstrādāt ar šādu metodi: vispirms dažas stundas mērcēt un peldēt ar pentilacetātu, pēc tam vairākas reizes noskalot ar destilētu ūdeni un visbeidzot iegremdēt un peldēt vara sietu bezūdens etanolā dehidratācijai. Ja pēc iepriekšminētajām metodēm vara sieta joprojām nav tīra, to var mērcēt 1-2 minūtes atšķaidītā koncentrētā sērskābē (1:1), vai dažas minūtes vārīt 1% NaOH šķīdumā, vairākas reizes noskalot ar destilētu ūdeni un pēc tam dehidrēt bezūdens etanolā vēlākai lietošanai.
