Ir divu veidu fluorescences mikroskopi, kuru pamatā ir to gaismas ceļi:
1. Transmisijas fluorescences mikroskops: ierosmes gaismas avotu izmanto, lai ierosinātu fluorescenci, izlaižot parauga materiālu caur kondensatora lēcu. Var izmantot arī parasti izmantotos tumšā lauka koncentratorus, un parastos koncentratorus var izmantot, lai pielāgotu reflektoru, lai novirzītu un novirzītu ierosmes gaismu uz paraugu. Šis ir salīdzinoši vecmodīgs fluorescences mikroskops. Tā priekšrocība ir spēcīga fluorescence zemā palielinājumā, bet trūkums ir tas, ka tā fluorescence samazinās, palielinoties palielinājumam. Tāpēc tas ir labāks lielāku paraugu materiālu novērošanai.
2. Krītošās gaismas fluorescences mikroskops ir jauna veida fluorescences mikroskops, kas izstrādāts mūsdienās. Atšķirībā no iepriekš minētā ierosmes gaisma nokrīt no objektīva lēcas uz leju uz parauga virsmu, izmantojot to pašu objektīvu kā apgaismojuma kondensatoru un objektīva lēcu fluorescences savākšanai. Optiskajam ceļam, kas atrodas 45 grādu attālumā no gaišā urāna, jāpievieno divu krāsu staru sadalītājs. Leņķis, ierosmes gaisma tiek atspoguļota objektīva lēcā un fokusēta uz paraugu. Parauga radītā fluorescence, kā arī ierosmes gaisma, kas atstarota no objektīva lēcas virsmas un vāka stikla, nonāk objektīva lēcā un atgriežas divkrāsu staru kūļa sadalītājā, atdalot ierosmes gaismu un fluorescenci. Pēc tam atlikušo ierosmes gaismu absorbē bloķējošais filtrs. Ja tiek izmantotas dažādas ierosmes filtru/divkrāsu staru atdalītāju/bloķējošo filtru kombinācijas, tās var apmierināt dažādu fluorescējošu reakciju produktu vajadzības. Šī fluorescences mikroskopa priekšrocības ir vienmērīgs lauka apgaismojums, skaidra attēlveidošana un spēcīgāka fluorescence ar lielāku palielinājumu.
Norādījumi fluorescences mikroskopa lietošanai
1. Ieslēdziet gaismas avotu. Lai sasniegtu maksimālo spilgtumu, īpaši augsta spiediena dzīvsudraba lampa ir jāuzsilda dažas minūtes.
2. Transmisijas fluorescences mikroskopijai nepieciešams uzstādīt nepieciešamo ierosmes filtru starp lampas avotu un kondensatoru un attiecīgo bloķējošo filtru aiz objektīva. Krītošās gaismas fluorescences mikroskopam optiskā ceļa spraugā jāievieto nepieciešamais ierosmes filtrs/divkrāsu staru sadalītāja/bloķējošā filtra bloks.
3. Novērojiet ar mazjaudas mikroskopu un noregulējiet gaismas avota centru atbilstoši dažāda veida fluorescences mikroskopu regulēšanas ierīcei tā, lai tas atrastos visa apgaismojuma punkta centrā.
4. Novietojiet paraugu un fokusējiet to novērošanai. Lietošanas laikā jāpievērš uzmanība: pirms filtra uzstādīšanas nevērojiet to tieši ar acīm, lai izvairītos no acu bojājumiem; Vērojot paraugus ar eļļas mikroskopu, jāizmanto īpašs nefluorescējošas eļļas mikroskops; Pēc augstspiediena dzīvsudraba spuldzes izslēgšanas to nevar uzreiz ieslēgt. Restartēšana prasa 5 minūtes, pretējā gadījumā tas būs nestabils un ietekmēs dzīvsudraba lampas kalpošanas laiku.
(3) Vērojot zem fluorescences mikroskopa uz mācību platformas, izmantojot zilas violetas gaismas filtru, var redzēt šūnas, kas iekrāsotas ar 0,01% akridīna oranžo fluorescējošu krāsu. Kodols un citoplazma ir satraukti, lai radītu divas dažādas fluorescences krāsas (tumši zaļu un oranži sarkanu).
