Divas plaši izmantotas mikroskopiskās novērošanas metodes
1, tumšā lauka novērojums
Tumšais redzes lauks patiesībā ir tumšā lauka apgaismojums Tā īpašības atšķiras no spilgtā redzes lauka, jo tas tieši nenovēro izgaismojošo gaismu, bet gan novēro pārbaudāmā objekta atstaroto vai izkliedēto gaismu Tāpēc redzes lauks kļūst par tumšu fonu, savukārt pārbaudāmais objekts sniedz spilgtu attēlu.
Tumšā lauka princips ir balstīts uz optisko Tindala fenomenu, kur cilvēka acs putekļu daļiņas nevar novērot, ja tās ir pakļautas spēcīgai gaismai spēcīgas gaismas izraisītas difrakcijas dēļ. Ja gaisma tiek projicēta uz to slīpi, daļiņu apjoms gaismas atstarošanas dēļ palielinās, padarot tās redzamas cilvēka acij.
Tumšā lauka novērošanai nepieciešamais speciālais piederums ir tumšā lauka prožektors Tā īpašība ir tāda, ka tas neļauj gaismas staram iziet cauri objektam no apakšas uz augšu, bet gan maina gaismas ceļu, lai tas būtu slīpi vērsts pret objektu, lai apgaismojuma gaisma tieši nenonāktu objektīva objektīvā, un izmanto spilgtu attēlu, ko veido atstarošanas vai difrakcijas gaisma, nekā novērošanas laukā ir daudz augstāka novērošanas lauka izšķirtspēja. sasniedzot līdz 0,02-0,004
2, fāzes kontrasta spoguļa pārbaudes metode
Veiksmīgais fāzu kontrasta mikroskopijas izgudrojums optisko mikroskopu izstrādē ir nozīmīgs sasniegums mūsdienu mikroskopijas tehnoloģijā Mēs zinām, ka cilvēka acs spēj atšķirt tikai gaismas viļņu viļņa garumu (krāsu) un amplitūdu (spilgtumu). Bezkrāsainiem un caurspīdīgiem bioloģiskiem paraugiem, kad gaisma iet cauri, viļņa garums un amplitūda īpaši nemainās, apgrūtinot parauga novērošanu spilgtā laukā.
Fāzes kontrasta mikroskops izmanto pārbaudāmā objekta optiskā ceļa garuma atšķirību spoguļa pārbaudei, efektīvi izmantojot gaismas traucējumu fenomenu, lai pārveidotu fāzes atšķirību, ko cilvēka acs nevar atšķirt, par atšķirīgu amplitūdas starpību. Pat bezkrāsainas un caurspīdīgas vielas var kļūt skaidri redzamas Tas ievērojami atvieglo dzīvo šūnu novērošanu, tāpēc fāzu kontrasta mikroskopija tiek plaši izmantota apgrieztajos mikroskopos
Fāzu kontrasta mikroskopijas pamatprincips ir pārveidot paraugam cauri ejošas redzamās gaismas optiskā ceļa atšķirību amplitūdu starpībā, tādējādi uzlabojot kontrastu starp dažādām struktūrām un padarot tās skaidras un redzamas. Pēc tam, kad gaisma iziet cauri paraugam, notiek refrakcija, novirzoties no sākotnējā optiskā ceļa un aizkavējoties par 1/4 λ (viļņa garums). Ja optiskā ceļa starpība tiek palielināta vai samazināta vēl par 1/4 λ, optiskā ceļa starpība kļūst par 1/2 λ, un traucējumi starp diviem gaismas stariem palielinās vai samazinās pēc ass apvienošanas, uzlabojot kontrastu Struktūras ziņā fāzu kontrasta mikroskopiem ir divas
īpašas atšķirības no parastajiem optiskajiem mikroskopiem:
1. Gredzenveida diafragma atrodas starp gaismas avotu un kondensatoru, un tās funkcija ir veidot dobu gaismas konusu, kas iet cauri kondensatoram un fokusējas uz paraugu.
2. Leņķiskās fāzes plāksne: objektīva lēcai pievieno fāzes plāksni, kas pārklāta ar magnija fluorīdu, kas var aizkavēt tiešās vai difrakcijas gaismas fāzi par 1/4 λ. To var iedalīt divos veidos:
(1) . A+fāzes plāksne: aizkavējiet tiešo gaismu par 1/4 λ un pievienojiet divas gaismas viļņu kopas pēc asu apvienošanas. Amplitūda palielinās, un parauga struktūra kļūst gaišāka par apkārtējo vidi, veidojot spilgtu kontrastu (vai negatīvu kontrastu)
(2) . B+fāzes plāksne: aizkavējiet izkliedēto gaismu par 1/4 λ un atņemiet gaismas viļņus pēc divu gaismas staru kopu asu apvienošanas, kā rezultātā samazinās amplitūda un veidojas tumšs kontrasts (vai pozitīvs kontrasts). Struktūra kļūst tumšāka par apkārtējo vidi
