Kādas ir konfokālās lāzermikroskopijas priekšrocības
Salīdzinot ar tradicionālajiem plaša lauka mikroskopiem, lāzerskenējošajai konfokālajai mikroskopijai ir augstas izšķirtspējas, augstas izšķirtspējas un augstas jutības īpašības. To plaši izmanto biomedicīnas jomā un ir kļuvis par svarīgu attēlveidošanas rīku šajā jomā. Kāpēc konfokāls var iegūt tik daudz mīlestības, un kādas tam ir priekšrocības? Šajā rakstā ir uzskaitīti trīs aspekti, lai apspriestu konfokālās priekšrocības.
Savāc signālu tikai fokusa plaknē, padarot attēlu skaidru no izplūduma
Tātad, kā konfokālā mikroskopija panāk šo priekšrocību? Tas ir saistīts ar galveno konfokālo aparatūru — caurumu, kā parādīts 2. attēlā. Tas ir neliels caurums detektora priekšā un novietots uz optiskās plaknes, kas ir konjugēta ar parauga fokusa plakni. Kad ierosmes gaisma apstaro paraugu, gan parauga laukuma fokusa plakne, gan nefokālā plakne tiks ierosināta, lai radītu fluorescences signālus, pielāgotu atbilstošo cauruma izmēru (parasti 1 Au), lai fluorescences signāls fokusa plaknē. (zaļa punktēta līnija) var būt fluorescējoši signāli (sarkanas un zilas punktētas līnijas), kas iziet cauri caurumu, lai sasniegtu detektoru ārpus fokusa plaknes, nevar sasniegt detektoru caur caurumu. Izmantojot aparatūras caurumus, konfokāls var iegūt skaidrus un augstas kvalitātes attēlus, nemainot parasto fluorescences mikroskopu izgatavošanas metodi.
Pateicoties cauruma esamībai, mēs varam iegūt signālu tikai fokusa plaknē un iegūt augstas izšķirtspējas divdimensiju attēlu. Nepārtraukti regulējot Z ass pozīciju, var iegūt divdimensiju attēlus dažādās Z ass pozīcijās un iegūt nepārtrauktu "optiskās šķēles" attēlu sēriju. Pēc šo optisko šķēlumu iegūšanas 3D moduli, kas aprīkots ar instrumenta programmatūru, var izmantot, lai rekonstruētu 3D attēlu, lai izveidotu skaidru 3D attēlu. Šī nesagraujošā, nepārtrauktā optisko slāņu attēlu kolekcija realizē "šūnu CT" funkciju.
Kolokalizācijas rezultātu precizitāte ir cieši saistīta ar attēla izšķirtspēju, tāpēc mums, veicot kolokalizācijas eksperimentus, jāizvēlas augstākas izšķirtspējas attēlveidošanas metode. Salīdzinot ar tradicionālajiem mikroskopiem, konfokālā mikroskopija ir kļuvusi par spēcīgu kolokalizācijas pētījumu rīku, pateicoties tās augstas izšķirtspējas priekšrocībām.
Difrakcijas robežas pastāvēšanas dēļ parastā konfokālā optiskā izšķirtspēja ir aptuveni 200 nm. Ja mums ir jānovēro struktūras, kas lielākas par 200 nm, konfokālais var precīzi noteikt kolokalizācijas pakāpi. Ja nepieciešama kolokalizācijas analīze, var izvēlēties konfokālajā programmatūrā aprīkoto kolokalizācijas analīzes moduli.
