Kāpēc eļļas lēcas palielinājums ir lielāks nekā parastajam objektīvam?
Iemesli, kāpēc baktērijas ir jāfiksē pirms krāsošanas mikrobioloģiskajos eksperimentos:
1: nogalina šūnas, ir viegli krāsot ar krāsvielu.
2: Ļaujiet baktērijām pielipt pie stikla priekšmetstikliņa, un tās nav viegli nomazgāt ar ūdeni.
Piestiprinot, tas lēnām jāizžāvē. Ja patiešām vēlaties paātrināt, varat to pāris reizes nožūt attālumā virs spirta lampas liesmas. Neļaujiet stiklam slīdēt uzkarst, pretējā gadījumā tas var iznīcināt baktēriju dzīvības formu.
Gramu krāsošana un baktēriju mikroskopiskā novērošana
1. Eksperimenta princips
Grama iekrāsošanas princips: baktērijas atšķirīgi reaģē uz Grama krāsošanu to šūnu sieniņu sastāva un struktūras dēļ. Grampozitīvo baktēriju šūnu siena galvenokārt ir tīkla mezgls, ko veido peptidoglikāns. Apstrādājot ar etanolu, tīkla struktūras poru izmērs dehidratācijas dēļ kļūst mazāks un caurlaidība samazinās, tāpēc kristālvioletā joda komplekss Vielu nav viegli eluēt un noturēt šūnā, un zilā- primārā krāsošanas līdzekļa purpursarkanā krāsa joprojām tiek saglabāta pēc atkrāsošanas un pretkrāsošanas. Gramnegatīvo baktēriju šūnu sienas peptidoglikāna slānis ir plāns un lipīdu saturs ir augsts, tāpēc, veicot atkrāsošanas apstrādi, lipīds tiek izšķīdināts etanolā (vai acetonā), un palielinās šūnu sienas caurlaidība, tāpēc ka kristālvioletā-joda komplekss Vieglāk ir eluējams, un pēc pretkrāsošanas ar pretkrāsojumu šūnas tiek iekrāsotas ar pretkrāsojuma sarkano krāsu. Mikroskopa attēlveidošanas princips: mūsdienu parastajos optiskajos mikroskopos attēla palielināšanai izmanto divas lēcu sistēmas: okulāru un objektīvu, tāpēc tos bieži sauc par saliktajiem mikroskopiem. Mikroskopa optiskajā sistēmā objektīva lēcas veiktspēja ir viskritiskākā, bet eļļas lēcas palielinājums ir vislielākais, kas ir vissvarīgākais mikrobioloģiskajos pētījumos. Iegremdēšanas eļļas pievienošanas starp priekšmetstikliņu un objektīvu galvenais mērķis ir palielināt apgaismojuma spilgtumu un palielināt mikroskopa izšķirtspēju. Eļļu izmanto gaisa vietā kā gaismas caurlaidības līdzekli, lai samazinātu gaismas refrakciju vai kopējo atstarošanu un padarītu redzamo attēlu skaidrāku.
2. Eksperimentālās iekārtas
1. Kolonijas:
Escherichia coli 24h barības agara slīpā kultūra,
Staphylococcus aureus apmēram 24h barības agara slīpā kultūra, Bacillus subtilis 12-18h barības agara slīpā kultūra.
2. Šķīdumi vai reaģenti:
Destilēts ūdens, joda šķīdums, kristālvioletas krāsošanas šķīdums, 95% spirta, safranīna krāsošanas šķīdums, ciedra eļļa. 3. Instruments:
Mikroskops, priekšmetstikliņi, inokulācijas cilpa, spirta lampa, pincete, lēcas salvete.
3. Eksperimentālie soļi
a:
1. Smērēt
Izņemiet priekšmetstikliņu, aizdedziet priekšmetstikliņu, sadedziniet uz priekšmetstikliņa esošo spirtu un sterilizējiet to, ielieciet vidū nelielu pilienu destilēta ūdens, izmantojiet inokulācijas cilpu, lai viegli savāktu nelielu daudzumu baktēriju uz slīpās testa vides. caurule, visa procesa laikā mēģenes mutei jābūt virs spirta lampas, un ātrumam jābūt lielam, lai novērstu barotnes piesārņošanu. Pēc tam ar apļveida kustībām iesmērējiet mazos ūdens pilienus uz stikla priekšmetstikliņa, apstājieties, kad ūdens pilieni ir duļķains, un pagaidiet, līdz tie nožūst un nofiksējas.
2. Primārā krāsošana
Nometiet uz kolonijas kristālvioletu (ir piemēroti tikai pārklāt baktēriju plēvi), krāsojiet 1-2 minūtes, nolejiet krāsošanas šķīdumu un no priekšmetstikliņa augšdaļas noskalojiet ar smalku ūdeni, līdz eluāts ir bezkrāsains, un novietojiet traipu uz priekšmetstikliņa. Nokratiet šķēlēs ūdeni.
3. Kodinātājs
Pa pilienam pievienojiet joda šķīdumu, lai noskalotu atlikušo ūdeni, nosedziet apmēram 1 minūti un nomazgājiet ar ūdeni.
4. Atkrāsošana
Nokratiet ūdeni no priekšmetstikliņa, nolieciet priekšmetstikliņu un pievienojiet 95% spirta, lai tas atkrāsotos zem baltā fona, līdz izplūstošais spirts vienkārši nešķiet zils, nekavējoties noskalojiet spirtu ar ūdeni un novietojiet stikla priekšmetstikliņu sakratīt. nost ūdeni uz šķēlītēm.
5. Pretkrāsošana
Pretkrāsojiet ar safranīna šķīdumu apmēram 1-2 minūtes, nomazgājiet ar ūdeni un pēc tam nosusiniet ar absorbējošu papīru
6. Mikroskopiskā izmeklēšana:
Zem zemā palielinājuma objektīva meklējiet novērojamo baktēriju koloniju (turpiniet kustināt slaidu, ja jūtat sarkanu ēnu, nekavējoties apstājieties, noregulējiet palielinājumu, ja tā nav kolonija, turpiniet atrast), paceliet objektīva cilindru, un tad pārslēdzieties uz eļļas spoguli. Pievienojiet parauga laukumam pilienu ciedra eļļas un uzmanīgi nolaidiet objektīva cilindru ar rupjo regulētāju, lai eļļas lēca būtu iegremdēta eļļā un gandrīz pieskaras paraugam. Paceliet kondensatoru augstākajā pozīcijā un pilnībā atveriet diafragmas atvērumu, izmantojiet rupjo regulētāju, lai lēnām paceltu objektīva cilindru, līdz objekta attēls parādās redzes laukā, un izmantojiet smalko regulētāju, lai padarītu to skaidru un fokusā.
